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技术文章
活体成像检测底物:D-Luciferin D-虫荧光素

活体成像研究底物之:

Firefly D-Luciferin D-虫荧光素(Luc基因)

——活体成像研究/体外生物发光研究/转录水平研究

 

搜索关键词:

Luc reporter gene 报告基因;Luciferase 萤火虫荧光素酶;In vivo imaging 活体成像研究;荧光素酶/ATP水平研究;报告基因质粒;报告基因bing毒颗粒;萤火虫荧光素甲虫荧光素;CAS103404-75-7

 

基本描述:

D-荧光素(D-Luciferin)是荧光素酶(Luciferase)的常用底物,普遍用于整个生物技术领域,特别是体内活体成像技术。作用机制是在ATP和荧光素酶的作用下,D-荧光素(底物)被氧化发光。当荧光素过量时,产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性(见下图)。将携带荧光素酶编码基因(Luc)的质粒转染进入细胞后,导入研究动物如大小鼠体内,之后注入荧光素,通过生物发光成像技术(BLI)来检测光强度变化,从而实时监测疾病发展状态或药物的治疗功效等。也可以利用ATP对此反应体系的影响,根据生物发光强度的变化 来指示能量或生命体征。

 

基本应用:

1. 体内活体成像In vivo imaging

2. 体外研究,包括荧光素酶和ATP水平分析;报告基因分析;高通量测序和各种污染检测。

 

常见商业化类型的差异(荧光素钾,钠,游离酸):

目前市场上常见的有三种产品形式,D-荧光素(游离酸)D-荧光素(钠盐),和D-荧光素(钾盐)。这三种产品主要差别在于溶解特性。

1D-荧光素(游离酸)在水以及缓冲体系内的溶解性都很弱,除非溶于弱碱如NaOHKOH溶液。溶于甲醇(10 mg/ml)和DMSO50 mg/ml)。

2D-荧光素(钠盐)和D-荧光素(钾盐)能够非常容易且快速的溶入水或者缓冲液中,使用方便,溶剂无毒性,特别适合体内实验。配成溶液后的三种产品,在绝大多数应用上都没有实质性的差别。

3D-荧光素(钠盐)和D-荧光素(钾盐)基本上没有差别,主要是使用习惯等因素影响。整体来看,钾盐的应用文献明显多于钠盐。

 

使用方法【体内成像/腹腔注射】

由于D-荧光素进入体内的生物分布非常快速且动力学具组织依赖性,因此,研究人员需正式实验前确定自身动物在D-荧光素注射后的成像采集zuijia时间。通过建立动物模型的荧光素酶动力学曲线来完成。

.动力学曲线建立(Kinetic curve

1.1 如下腹腔注射(i.p.D-荧光素。倾向于注射清醒小鼠,如果需要在注射前麻醉小鼠,也是可以的,但可能会稍微延长动力学(荧光素酶表达峰值时间点)。

1.2 等待三分钟,然后按照自身选择的方法如气体麻醉或注射麻醉。

1.3 将麻醉动物置于成像腔内,D-luciferin注射约5min后拍*张照片。

1.4 每隔5-10min采集图像zui高40min,建立模型相关的荧光素酶表达动力曲线。使用2%异氟烷的麻醉健康动物能在活体成像系统如IVIS内安全放置45min

1.5 一旦建立曲线后能确定zuijia的信号采集点。大部分的模型都是在D-荧光素注射10-20min后采集图像。

二.D-荧光素溶液准备

2.1 用无菌的PBSw/o Mg2+)或者DPBSw/o Mg2+)配制D-荧光素(钠盐/钾盐)储存液(15mg/ml,根据动物体重和单次注射体积来决定),0.2µm滤膜过滤除菌。混匀后立即使用或分装于-20-80冻存,避免反复冻融。一旦使用,放到4解冻,保持冰冷且避光。

2.2 注射150mg/kg体重。(比如,体重10g小鼠注射100μl 15mg/ml的储存液从而给1.5mg D-荧光素);

2.3 于成像前5-15min腹腔注射D-荧光素。

【注意】:对每只动物模型需要建立D-荧光素动力学曲线研究,以确定荧光素注射后达到信号峰值的时间点。

三.腹腔注射(i.p.

zuijia射点(Preferred site

动物左下腹部(lower left abdominal quadrant

针头大小(Needle size

25 gauge,通常与1ml1 cc)注射器配套使用

体积(Volumn

10g体重小鼠加入100μl 15mg/ml D-荧光素。【腹腔单次注射1ml 无刺激性溶液对动物无任何压力】。

动物位置(Position of animal):

手动固定,背卧位(腹部向上),动物颅(头部)朝下

注射(Injection):

Needle should be bevel-side up and slightly angled when entering the abdominal cavity. Penetrate just through abdominal wall (about 4-5mm). The tip of the needle should just penetrate the abdominal wall of the animal’s left lower abdominal quadrant.

 

应用示例【生物化学发光体内成像】

Fig. 1 Image illustrates the IVIS spectrum imager and a mouse placed inside the camera box.

Fig. 2 Bioluminescence in vivo imaging. A. Representative luciferase time course (every 2 min) imaging of mice bearing subcutaneous tumors injected with luciferin. B. Graph illustrates the bioluminescence saturation of the whole mouse (displayed in A.) obtained

 

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规格

价格(元)

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MX4602-100MG

D-Luciferin, Sodium Salt D-荧光素(钠盐

100mg

998

现货

MX4602-500MG

D-Luciferin, Sodium Salt D-荧光素(钠盐

500mg

2500

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MX4602-1G

D-Luciferin, Sodium Salt D-荧光素(钠盐

1g

4500

现货

MX4603-100MG

D-Luciferin, Potassium Salt  D-荧光素(钾盐

100mg

998

现货

MX4603-500MG

D-Luciferin, Potassium Salt  D-荧光素(钾盐

500mg

2500

现货

MX4603-1G

D-Luciferin, Potassium Salt  D-荧光素(钾盐

1g

4500

现货

MX4601-250MG

D-Luciferin Firefly, Free Acid D-虫荧光素(游离酸)

250mg

1800

现货

MX4601-500MG

D-Luciferin Firefly, Free Acid D-虫荧光素(游离酸)

500mg

3000

现货

MX4601-1000MG

D-Luciferin Firefly, Free Acid D-虫荧光素(游离酸)

1g

5800

现货

MX4604-10MG

DMNPE-caged Luciferin D-荧光素(DMNPE笼闭

10mg

1350

期货

MX4604-50MG

DMNPE-caged Luciferin D-荧光素(DMNPE笼闭

50mg

5440

期货

 

注意事项

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】
 

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