活细胞ATP荧光探针

ATP-Red 1 (Live cell ATP probe)   活细胞ATP荧光探针

产品信息

产品描述

三磷酸腺苷（Adenosine triphosphate,ATP）主要在线粒体中产生，几乎所有生物体都依赖ATP。ATP不仅是所有细胞过程的主要能源，而且还是调节细胞运动、神经传递和离子通道功能的信号分子。因此，生物学研究中对细胞内ATP水平变化的监测变得尤为重要。

ATP-Red 1（CAS NO：1847485-97-5）正是在这样的背景下开发的一款优秀的多位点结合可切换的荧光探针，选择性和快速检测活细胞内的ATP水平[1]。活细胞成像显示其主要定位在线粒体，表现出良好的生物兼容性和膜渗透性。不仅能观察到由KCN和饥饿刺激引起的线粒体ATP降低，还能探测到凋亡早期发生的线粒体ATP增高，因此，是一款实用的工具以监测ATP相关的生理活动。

ATP-Red 1（CAS NO：1847485-97-5）的作用机制源其独特的构象变化（见Fig 1）[1]。自然状态下，ATP-Red 1以闭环和无荧光的形式存在，一旦遇到ATP，发生多位点反应（预测ATP分子上的氨基、磷酸基和核糖部分都有参与），使得探针内硼酸和核糖类似结构中的共价键断裂，环打开。从闭环到开环的结构变化引起荧光的显著增强。这一作用模式确保ATP-Red 1在与其他结构相近的核苷酸和胞内生物分子一起反应时，高选择性结合ATP。ATP-Red 1对多种分析物无交叉反应，包括：Zn2+、Mg2+、Ca2+、Na2+、K+、GSH、HOCl、H2O2、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、果糖、核糖、山梨糖、蔗糖、木糖、肝素、AMP、ADP、CMP、CDP、CTP、UMP、UDP、UTP、GMP、GDP或GTP。

Fig 1.ATP-Red 1与ATP的反应流程图

产品特性

1）CAS NO：1847485-97-5

2）分子式：C34H36BN3O4

3）分子量：561.48

4）纯度：≥98%

5）外观：固体

6）Ex/Em：510/590nm

7）溶解性：溶于DMSO（≥10mg/ml）

8）化学结构式：

保存与运输方法

保存：2-8℃避光干燥保存，长期不用可置于-20℃避光干燥保存，有效期至少一年。 

运输：室温运输。

注意事项

1） 关于化合物溶解性：产品特性内的“≥"表明溶于标示浓度，但饱和溶解度未知。不同批次化合物的溶解度会有差异。

2） 为了让化合物更好的溶解，可通过37℃加热或（和）超声波水浴中震动片刻来处理。若实验所需浓度过大甚至达产品溶解极限，请添加助溶剂助溶或自行调整浓度。

3） 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

4） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. 储存液的配制

1）于实验前将产品从低温取出，置于室温平衡至少20min；低速离心将所有的固体都沉淀至管底。

2）于超净台内开盖，直接往瓶内加入适量高质量无水的DMSO，使其充分溶解配制成10mM或其他浓度的储存液。比如：1mgATP-Red 1（Mw：561.48），加入178.1μl DMSO，充分溶解，混匀后即得到10mM的储存液。根据单次用量分装，≤-20℃避光干燥冻存，避免反复冻融。一般情况下，-20℃避光保存，一个月稳定；-80℃避光保存，六个月稳定。

2. 工作液的配制

于正式实验前，用适宜的生理缓冲液（比如：HHBS、HBSS）或无血清培养基稀释储存液到所需的工作浓度，比如：5-10µM。工作液现配现用！

3.   染色步骤

以下步骤仅做参考，用户可根据自身情况做调整。

1）细胞铺板：在合适的培养皿或培养板中接种细胞（比如：96孔板、玻底培养皿）；对于96孔板，接种密度一般在1~2 ×105个细胞/孔。

2）在适宜的培养条件下培养细胞到适宜的密度。

3）吸走培养基，用预热的PBS或无血清培养基清洗一次。

4）加入适量新鲜配制的ATP-Red 1染色工作液，原则上能完quan覆盖细胞即可。

5）37℃避光孵育15~30min。需根据细胞类型优化孵育时间。

6）用PBS或无血清培养基清洗一次以去除多余染料。

7）用荧光显微镜或安装有适合滤片的流式细胞仪（Ex/Em~510/590nm）来进行数据分析。

应用示例（来自文献）

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

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