重组霍乱毒素B亚基 血清
简要描述：
重组霍乱毒素B亚基 血清霍乱毒素（Cholera toxin，CTX）是霍乱弧菌产生的毒力因子，会引起严重腹泻以及人体脱水。CTX属于AB5亚基家族。天然六聚体蛋白含两个亚基，分子量约85kDa。由一个A亚基（约27.2kDa）和五个B亚基（约11.6kDa/亚基）组成，B亚基以五聚体环的方式排列，呈明显的五度对称，负责毒素识别并吸附细胞表面的神jing节苷脂GM1。
产品时间：2025-03-25
打印当前页Recombinant Cholera Toxin B subunit, CF568-conjugated重组霍乱毒素B亚基（CF568标记，红色荧光）
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
重组霍乱毒素B亚基（CF568标记，红色荧光） | MX0944-100UG | 100μg | 4278 |
背景描述
霍乱毒素（Cholera toxin，CTX）是霍乱弧菌产生的毒力因子，会引起严重腹泻以及人体脱水。CTX属于AB5亚基家族。天然六聚体蛋白含两个亚基，分子量约85kDa。由一个A亚基（约27.2kDa）和五个B亚基（约11.6kDa/亚基）组成，B亚基以五聚体环的方式排列，呈明显的五度对称，负责毒素识别并吸附细胞表面的神jing节苷脂GM1。
A亚基催化刺激性G蛋白α亚基（Gαs）的ADP核糖基化，降低GTPase活性和活化α亚基。Gαs的活化引起腺苷酸环化酶（AC）活性增加，进而促使cAMP水平提高。A亚基还能ADP核糖基化视杆细胞外节膜盘的转运蛋白，使得GTPase失活。霍乱毒素还是一种高效的黏膜疫苗佐剂，通过抑制IL-12生产来诱导2型辅助性T细胞的免疫应答。
霍乱毒素B亚基（CTB）对细胞无毒，本质上不含腺苷酸环化酶活性。CTB通过结合神jing节苷脂GM1附着到细胞上，是小胶质细胞的良好标记物（这类细胞表面富含神jing节苷脂GM1），但不适合标记少突胶质细胞或星形胶质细胞。
CTB是利用组化方法研究轴突运输的优秀示踪剂。CTB也是常用的脂筏标记物，脂筏是富含胆gu醇和鞘脂的膜微区，在细胞信号转导和蛋白质运输中发挥重要作用。
产品描述
本品是偶联上红色荧光素-CF568（Ex/Em=562/583 nm）的重组霍乱毒素B亚基（rCTB），即Recombinant Cholera Toxin B subunit, CF568-conjugated，简写：CF568 conjugated- rCTB，适用于神经学研究中的束路追踪，靶向神jing节苷脂GM1）结合和逆行运输。也可在活细胞或固定细胞成像中用作脂筏标记物和内吞示踪剂。
保存与运输方法
保存：-20℃保存，至少6个月有效。
运输：冰袋运输。
注意事项
1） 本品以冻干粉形式提供，由于量比较少，初次使用前需置于室温回温至少30min，低速离心后，再开盖直接往瓶内加入合适的溶剂进行溶解。
2） CF系列荧光染料是Biotium的注册商标，Alexa Fluor和DyLight系列染料是Thermo Fisher的注册商标，Cy系列染料是Cytiva的注册商标。
3） 本品仅供科研用途，绝不可以用于临床或诊疗用途。
4） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
以下是用荧光标记的rCTB对细胞进行标记的实验流程。对于其他的应用（比如：神经示踪），请根据应用查找相应的文献作为参考。
一、 自行准备材料
1.1 磷酸盐缓冲液（PBS）（比如：MS3552-500ML）
1.2 牛血清白蛋白（BSA）（比如：MP6101-5G）
1.3 HBSS（比如：MS3505-500ML）
1.4 4%多聚甲醛（比如：MM1504-500ML）
1.5 【可选】Hoehcst 33342（比如：MX4203-10MG，MX4203-1ML，MX4204-10ML）
二、 染料准备
重溶：将低温保存的CF568 conjugated- rCTB（规格：100μg）置于室温回温至少30min，低速离心3-5min，将粉末离心至管底。直接往瓶子加入100μl无菌水或1×PBS使其充分溶解，即得到1mg/ml的母液。
保存：新鲜制备的CF568 conjugated- rCTB（1mg/ml）置于+4℃避光保存，3个月稳定。亦可根据单次用量分装后，置于-20℃避光保存，6个月稳定，避免反复冻融。
三、 活细胞的表面标记
3.1用4℃预冷的HBSS+0.5% BSA清洗细胞一次；
3.2用4℃预冷的HBSS+0.5% BSA稀释CF568 conjugated- rCTB（1mg/ml）到工作浓度：400ng/ml-1μg/ml。
3.3吸走细胞内的缓冲液，加入新鲜配置的CF568 conjugated- rCTB染色工作液。+4℃避光孵育30min。
3.4用4℃预冷的HBSS+0.5% BSA清洗细胞三次；
3.5用4%多聚甲醛固定细胞，+4℃避光固定15min。
3.6用PBS清洗细胞二次，之后进行成像或接着做后续的染色。【注：根据实验需求，考虑是否加入核复染剂-Hoechst 33342等】
应用实例（来自文献，仅做参考）
Ref1）Uddin O, Anderson M, Smith J, Masri R, Keller A. Parabrachial complex processes dura inputs through a direct trigeminal ganglion-to-parabrachial connection. Neurobiol Pain. 2021 Jan 21;9:100060. doi: 10.1016/j.ynpai.2021.100060. PMID: 33537510; PMCID: PMC7840999.
实验目的：解剖追踪（Anatomical tracing）
实验方法：We used a glass pipette with a 40 µm tip to pressure inject (Nanoliter 2010 pump, World Precision Instruments, Sarasota, FL) 500 nL (50 nl/min) of CF568-conjugated cholera toxin B (CF568 conjugated CTB;) into PB unilaterally (right side). We made a craniotomy over the right middle meningeal artery and carefully exposed the dura, applying 5 µl of Fluorogold (Hydroxystilbamine) to the area, diluted to 5% in sterile saline, using a sterile pipette tip. We covered the dura application site with sterile Gelfoam and closed the incision with nylon suture. One week after tracer application we deeply anesthetized the rat with urethane and performed a transcardial perfusion with 0.05M PBS followed by 4% PFA.
实验图片：
Fig.Dura afferents project directly to PB. (A) A map of the injection site cores, depicted by black outlines. (B) The diagram depicts the experimental setup. CTB labels PB-projecting TG neurons and Fluorogold labels dura-innervating TG neurons. (C) Examples of dual-labeled neurons are representative images from 3 different animals–arrows denote double labeled cells. The green arrows indicate Fluorogold labeling and the red arrows indicate CTB labeling. Confocal images are shown in their native grayscale format.
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MS3505-500ML | 1×Hanks平衡盐rong液（含钙镁，无酚红） | 500ml |
MP6101-5G | BSA, Standard Grade牛血清白蛋白（标准级别） | 5g |
附录I几款CF染料的光谱特征
CF488A | CF568 | CF594 | CF647 | CF680R | |
最大Abs/Em | 490/515 nm | 562/584 nm | 593/614 nm | 650/665 nm | 680/701 nm |
摩尔吸光系数 | 70,000 | 100,000 | 115,000 | 240,000 | 140,000 |
分子量 | ~914 | ~714 | ~730 | ~836 | ~912 |
激发激光线 | 488nm | 532 nm or 568 nm | 561 to 568 nm | 633 or 635 nm | 680 or 685 nm |
可替代染料 | Alexa Fluor 488 Cy2 DyLight 488 FITC | Alexa Fluor 568 ATTO 565 Rhodamine Red | Alexa Fluor594 Texas Red DyLight 594 | Alexa Fluor647 Cy5 DyLight 649 | Alexa Fluor680 Cy5.5 DyLight 680 IRDye 680LT |
应用 | 荧光显微镜 共聚焦显微镜 流式细胞仪 超分辨率成像（STED、TIRF） | 共聚焦显微镜 单分子成像 超分辨率成像（SIM, TIRF, STED，多色STORM） | 荧光显微镜 共聚焦显微镜 流式细胞仪 | 荧光显微镜 共聚焦显微镜 流式细胞仪 超分辨率成像（多色STORM） | 小动物成像仪 超分辨率成像（多色STORM、3D） |
— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】
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