Dispase II 分散酶II 流式分析
简要描述:
Dispase II 分散酶II 流式分析 中性蛋白mei(Neutral protease),商业名称Dispase II,也称分散酶II,普遍用于不同组织和器官中的细胞分离。Dispase II是一种非特异性金属蛋白酶,能快速有效且温和的破坏组织细胞外基质释放单细胞培养物(原代细胞培养物)或收集已培养的细胞将其转移到新的培养基质上(传代培养)。
产品时间:2024-08-19
Dispase II 分散酶II(中性蛋白mei)
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格(元) |
Dispase II 分散酶II(中性蛋白mei) | MX1006-100MG | 100mg | 550 |
Dispase II 分散酶II(中性蛋白mei) | MX1006-1000MG | 1g | 2150 |
产品描述
中性蛋白mei(Neutral protease),商业名称Dispase II,也称分散酶II,普遍用于不同组织和器官中的细胞分离。Dispase II是一种非特异性金属蛋白酶,能快速有效且温和的破坏组织细胞外基质释放单细胞培养物(原代细胞培养物)或收集已培养的细胞将其转移到新的培养基质上(传代培养)。另外,还能预防悬浮细胞培养过程中发生的成团现象。Dispase II极其稳定,不会受温度、pH和血清内容物的干扰;通过螯合剂或稀释很容易失活;酶活温和,对细胞损伤小,可良好维持细胞膜完整性。
本品来源于多粘芽孢杆菌(Bacillus polymyxa),无支原体或其他动物病毒污染。以非无菌的冻干粉形式提供,比活力≥0.8 U/mg蛋白,使用前需进行除菌。常用工作浓度范围为0.6-2.4 U/ml。
产品特性
1) EC NO:3.4.24.4
2) 同义名:Neutral protease中性蛋白mei
3) 比活力:≥0.8 U/mg protein (37℃, casein as substrate, pH 7.5)
4) 酶活力单位定义:在37℃,pH 7.5的反应条件下,1min内释放福林酚阳性反应氨基酸和多肽量相当于1 μmol (181 μg)酪氨suan所需的酶量即为一个活力单位。
5) 最佳pH:6.0 - 8.5
6) 激活剂:最佳Ca2+为2mM,该酶已含足量Ca2+确保最佳酶活力。
7) 抑制剂: EDTA, EGTA, Hg2+,以及其他重金属。该酶活性不受血清干扰。
保存与运输方法
保存:2-8℃干燥保存,至少1年有效。
运输:冰袋运输。
使用方法
一、储存液和工作液制备
1)储存液制备:用Hepe缓冲盐溶液(50 mM Hepes/KOH pH7.4, 150 mM NaCl)溶解Dispase II冻干粉,配制成10mg/ml的储存液,用0.22µM滤膜过滤除菌。本储存液置于2-8℃,2周稳定;根据单次用量分装冻存,高达2个月稳定,避免反复冻融。
2)工作液制备:使用时用合适的细胞培养液将储存液稀释到工作液浓度即可,常用工作浓度为0.6-2.4 U/ml。不推荐使用>2.4 U/ml的工作浓度。具体使用浓度请根据自身实验体系或参考文献来调整。
二、组织分离
1)用无菌手术刀或剪刀将组织切成3-4mm小片,之后用无菌PBS缓冲液清洗组织片几次;
2)用Dispase II工作液(0.6-2.4 U/ml)浸没并37℃孵育进行组织解离;
3)置于水平摇床上,低速转动,37℃孵育直至组织完quan解离;【注意】:第一次使用Dispase II,通过细胞计数来确定总反应时间。对于坚硬致密组织需要1h的孵育时间,不过孵育时间几小时也不会有副作用。
4)若有需要,将消化产物用无菌不锈钢网过筛,从而分离解散细胞和残留组织,或当更大片段组织静置到管底,轻轻倒出上层细胞。若需要进一步解离,则加入新鲜的Dispase II工作液到残留组织。
5)低速离心收集细胞,吸掉酶工作液;
6)用适当的细胞培养液重悬细胞,置于正常预优化条件下培养。
三、细胞亚培养
1)用37℃预热的Dispase II工作液完quan覆盖细胞,置于37℃孵育5min;
2)吸掉溶液,于37℃再孵育10min;
3)显微镜观察以确定消化情况,若有需要,可再孵育15min;
4)用细胞培养液重悬细胞,低速离心并用培养基清洗细胞几次;
5)用新鲜细胞培养液重悬细胞;
6)按照常规方法进行分盘传代。
注意事项
1)Dispase是Godo Shusei Co., Ltd.的注册商标。
2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
— — Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】
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