农杆菌化学感受态细胞 克隆与表达
简要描述：
农杆菌化学感受态细胞 克隆与表达EHA105菌株由EHA101菌株改造而来，染色体背景为C58，核基因含筛选标签—利fu平抗性基因rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒pEHA105（pTiBo542DT-DNA），此质粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件 质粒自身的T-DNA转移功能虽被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DN
产品时间：2024-06-25
打印当前页EHA105(pSoup) Chemically Competent Cell
农杆菌化学感受态细胞
产品标签：
EHA105菌株；农杆菌感受态细胞；Rifampicin（Rif） 利fu平；Kanamycin（kan）卡那mei素；EHA101；LBA4404；GV3101；AGL1；植物转基因研究；
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货号 | 产品名称 | 规格 | 价格（元） |
MF2473-1000UL | EHA105(pSoup) Chemically Competent Cell农杆菌电转感受态细胞 | 10×100μl | 288 |
MF2473-5000UL | EHA105(pSoup) Chemically Competent Cell农杆菌电转感受态细胞 | 50×100μl | 1228 |
产品描述：
EHA105菌株由EHA101菌株改造而来，染色体背景为C58，核基因含筛选标签—利fu平抗性基因rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒pEHA105（pTiBo542DT-DNA），此质粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件，pEHA105（pTiBo542DT-DNA）质粒自身的T-DNA转移功能虽被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移）。在EHA105菌株中转入help质粒：pSoup，即得到：EHA105 (pSoup)菌株，可帮助pGreen，62SK，pGs2系列质粒在农杆菌中复制，同时赋予该菌株四环素（tetR）抗性，适用于水稻、烟草等植物的转基因操作。
我司（懋康生物）提供的EHA105 (pSoup)化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，基因型为C58 (rifR) Ti pEHA105 (pTiBo542DT- DNA) Succinamopine (pSoup-tetR)，经pGs2质粒检测转化效率>104 cfu/μg DNA。
产品组分：
组分编号 | 组分名称 | 货号（规格） | |
MF2473-1000UL | MF2473-5000UL | ||
MF2473-A | EHA105(pSoup)Chemically Competent Cell | 10×100μl | 50×100μl |
MF2473-B | pGs2 Control Vector (10ng/μl) | 10μl | 10μl |
保存与运输条件：
保存：-80℃保存，1年有效。
运输：干冰运输。
注意事项
1） 感受态细胞应保存在-80℃，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。
2） 整个转化操作，严格根据相应温度及无菌条件要求进行。
3） 加入质粒的体积不应大于感受态体积的1/10。质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，会导致转化效率急剧下降。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
4） 为确保转化效率，整个操作过程应尽量轻柔，并保持低温。
5） 转化高浓度的质粒可相应减少最终涂板用量。
6） 平板上克隆密度过大时，由于营养不足，克隆生长变慢，菌落变小。为获得大菌落，应减少质粒用量。
7） 培养基中加入利fu平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌；根据所用菌株抗性加入链mei素或庆大mei素可防止Ti质粒丢失，但链mei素不利于农杆菌的转基因操作，一般培养农杆菌时不考虑链mei素或庆大mei素，因Ti质粒丢失的概率极低（基本可以忽略）
8） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
1) 取-80℃保存的感受态细胞于室温或手心片刻待其部分融化，达到冰水混合状态时插入冰浴中使其完quan融化。
2) 往100μl感受态细胞悬液中加入0.01~1μg（体积不大于10μl）质粒DNA，用手拨da管底使其混匀，依次于冰上静置5min，液氮5min，37℃水浴5min，冰浴5min。
【注意】：次使用，建议做预实验确定所加质粒的用量。
3) 加入700μl无抗生素的LB或YEB液体培养基，于28℃振荡培养2-3h。
4) 6,000rpm离心1min，吸掉600ul上清，之后用枪轻轻吹打重悬菌体。之后加到含相应抗生素的LB或YEB平板上，用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min，待液体被吸收后，倒置平板，28℃培养2-3天。
【注意】：当平板只含50μg/ml卡那mei素时，28℃培养48h即可；当平板中同时加入50μg/ml卡那mei素和10μg/ml利fu平时，需28℃培养48-60h；当平板中同时加入50μg/ml卡那mei素和20μg/ml利fu平时，需28℃培养60-72h；不建议使用超过20μg/ml的利fu平用于平板或液体培养。
5）目的克隆的液体培养：
j小量摇菌：往15ml的圆底透气试管中加入1ml含对应抗生素的LB液体培养基，从新鲜培养的平板上挑1-2个单菌落接种，30℃，200rpm摇菌24-48h。
k大量摇菌：100ml透气三角瓶内加入少于20ml含对应抗生素的LB液体培养基，取小摇菌液按2%比例接菌，30℃，200rpm摇菌24-48h。
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附表1固体和液体LB培养基配方
组分Component | LB（液体）/升 | LB（固体）/升 |
胰蛋白胨Tryptone | 10g | 10g |
酵母提取物Yeast extract | 5g | 5g |
氯化钠NaCl | 10g | 10g |
1N NaOH | 调整pH至7.0 | 调整pH至7.0 |
琼脂Agar | / | 15g |
附表2固体和液体YEB培养基配方
组分Component | YEB（液体）/升 | YEB（固体）/升 |
胰蛋白胨Tryptone | 5g | 5g |
酵母提取物Yeast extract | 1g | 1g |
牛肉浸膏Beef Extract | 5g | 5g |
蔗糖Sucrose | 5g | 5g |
七水硫suan镁MgSO4·7H2O | 0.49g | 0.49g |
1N NaOH | 调整pH至7.0 | 调整pH至7.0 |
琼脂Agar | / | 15g |
附表3常见农杆菌对抗生素敏感性总表
农杆菌菌株 | 羧苄（carb） | 链mei素（strep） | 利fu平（rif） | 庆大mei素（gent） | 卡那mei素（kan） |
EHA101 | S | S | R | S | R |
EHA105 | S | S | R | S | S |
LBA4404 | S | R | R | S | S |
GV3101 | S | S | R | R | S |
AGL1 | R | S | R | S | S |
【备注】：S代表敏感，R代表抗性。 | |||||
— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作，主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本，以诚为信、合同守信"的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。
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