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Caspase-6活性检测试剂盒细胞增殖

Caspase-6活性检测试剂盒细胞增殖

简要描述:

Caspase-6活性检测试剂盒细胞增殖 Caspases(Cysteine-requiringAspartate Proteases)是一个高度保守的半胱an酸蛋白酶家族,特异性识别底物中的天冬氨酸残基,在介导细胞凋亡的过程中发挥着非常重要的作用。

产品时间:2024-05-29

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Caspase-6 Activity Assay Kit (Colorimetric)

Caspase-6活性检测试剂盒(比色法)


 

产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

Caspase-6活性检测试剂盒(比色法)

MX3227-20T

20T

880

Caspase-6活性检测试剂盒(比色法)

MX3227-100T

100T

2890


产品描述

Caspases(Cysteine-requiringAspartate Proteases)是一个高度保守的半胱an酸蛋白酶家族,特异性识别底物中的天冬氨酸残基,在介导细胞凋亡的过程中发挥着非常重要的作用。Caspases以潜在酶原的形式表达,通过自发蛋白分解机制或经其他蛋白酶(通常是其他caspases)加工处理的方式被活化。人caspases可细分为三大功能组:细胞因子活化(caspase-1,-4,-5和-13),凋亡启动(caspase-2,-8,-9和-10)和凋亡执行(caspase-3,-6和-7)。

Caspase-6(Caspase 6),也称为Mch-2,执行caspases组中主要的成员之一,在凋亡过程中发挥作用。一旦凋亡诱导发生,起始caspases(比如caspase-9)被切割和激活。激活的上游caspases进一步处理下游的执行caspases(比如:caspase-3和caspase-6),通过将它们切割成大和小亚基,从而启动caspase级联反应,导致凋亡。Caspase-6主要的靶标是膜关联蛋白Lamin A,这个蛋白被切割会引起细胞膜功能错误、膜起泡和最终死亡。

Caspase-6活性检测试剂盒(比色法)(Caspase-6 Activity Assay Kit, Colorimetric or Caspase-6 Colorimetric Assay Kit)以偶联上发色基团pNA的caspase-6序列特异性的多肽为底物。当底物被caspase-6剪切后,发色基团被释放出来,进而用酶标仪或分光光度计来测定其吸光值(λ=405nm或400nm)。通过计算OD凋亡诱导组/OD阴性对照组的比值来确定凋亡诱导组caspase-6的活化程度。

本品适用于培养细胞以及新鲜组织的caspase-6活性检测。


产品包装

编号

组分名称

保存方法

货号(规格)

MX3227-20T

MX3227-100T

MX3227-A

Lysis Buffer裂解缓冲液

2-8℃

5ml

20ml

MX3227-B

2× Reaction Buffer 2×反应缓冲液

2-8℃

1ml

5ml

MX3227-C

Caspase-6 Substrate Caspase-6底物

-20℃避光

100μl

500μl

MX3227-D

0.1M DTT

-20℃避光

60μl

250μl


保存与运输方法

保存:-20℃保存,1年有效。开盒后置Lysis Buffer和2× Reaction Buffer于2-8℃保存。Caspase-6 Substrate和0.1M DTT需要避光冻存。

运输:冰袋运输。


注意事项

1) Caspase-6 Substrate需避光保存和使用。

2) 某些凋亡诱导剂诱导的凋亡可能通过caspase-6非依赖的方式进行,此种情况使用本品检测的caspase-6活性无明显变化,则,需要考虑凋亡机制中的其他信号通路。

3) 起始细胞数量需达3~5×106个或新鲜组织量达50~100mg,以保证达到测定所需的100~200μg蛋白量。Caspase-6的活性与细胞裂解后的蛋白含量有关,如测定的OD值偏低,可通过增加细胞数量或组织量的方法来提高蛋白量。

4) 优先选择测定λ=405nm的吸光值;如有困难,再测定λ=400nm的吸光值。

5) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


使用方法

1.需要的其他试剂和材料

仪器:低温高速离心机、酶标仪或分光光度计(100μl的比色皿)(λ=405nm或400nm)、微量移液器、玻璃匀浆器(组织样本)

耗材:1.5ml微量离心管、96孔酶标板(透明)或100μl的比色皿

试剂:PBS、蛋白定量试剂(比如:Bradford法蛋白浓度测定试剂盒)


2.试剂准备

2.1 Lysis Buffer(含DTT)

于实验前,按每50μl Lysis Buffer 加入0.5μl DTT的比例准备足量的裂解工作液,置于4℃或冰上待用。

2.2 2×Reaction Buffer(含DTT)

于使用前,按每50μl 2×Reaction Buffer 加入0.5μl DTT的比例准备足量的反应工作液。


3.样本准备

3.1 细胞裂解

a)用合适方法诱导细胞凋亡,同时设立阴性对照组(不加诱导剂),收集3~5×106个细胞。

b)PBS洗涤细胞2次(2000rpm,离心5min),尽量吸尽PBS上清。

c)往离心的沉淀细胞中加入15~200μl预冷的Lysis Buffer(含DTT),吹打混匀。

d)置冰上裂解20~60min,其间涡旋振荡3~4次,每次10s;或冻融2~3次。

e)4℃,10,000rpm离心1min。

f)小心吸取上清(含裂解释放的蛋白质)转移到新的EP管内,置于冰上待用。

g)取少量上清(1~2μl),用常规方法(Bradford法)测定蛋白浓度。

3.2 组织裂解

a)取50~100mg组织置于培养皿内,用手术剪剪碎成3mm×3mm左右的小块,加入150~200μl预冷的Lysis Buffer(含DTT),用玻璃匀浆器上下手动匀浆15次,注意低温操作。

b)将组织匀浆液转移到1.5ml预冷的离心管,10,000rpm,4℃离心5min。

c)小心吸取上清(含裂解释放的蛋白质)转移到新的EP管内,置于冰上待用。

d)取少量上清(1~2μl),用常规方法(Bradford法)测定蛋白浓度。

4.Caspase-6活性检测

 

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名称

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