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LysoSensor 黄/蓝色溶酶体荧光探针

LysoSensor 黄/蓝色溶酶体荧光探针

简要描述:

LysoSensor 黄/蓝色溶酶体荧光探针 为满足研究者研究活细胞内溶酶体生成和功能的动力学特征,特此开发Lysosensor探针,一种区分酸性细胞器的荧光pH指示剂。该系列染料属于向酸性探针,由于质子化聚集在酸性细胞器上。这一质子化也使得因弱碱性侧链而封闭荧光的探针得以荧光释放,促使荧光信号增强。

产品时间:2024-03-21

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 LysoSensor Yellow/Blue DND-160 /蓝色溶酶体荧光探针      

产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

LysoSensor Yellow/Blue DND-160

MX4316-50UL

50µl

583

产品描述

为满足研究者研究活细胞内溶酶体生成和功能的动力学特征,特此开发Lysosensor探针,一种区分酸性细胞器的荧光pH指示剂。该系列染料属于向酸性探针,由于质子化聚集在酸性细胞器上。这一质子化使得因弱碱性侧链而封闭荧光的探针得以荧光释放,促使荧光信号增强。因此,LysoSensor探针遇酸后荧光信号呈现pH依赖性的增强。

LysoSensor Yellow/Blue DND-160(黄/蓝色溶酶体探针)是一种独*-特的比率型探针,呈现pH依赖性的双激发和双发射光谱峰(见Fig 1)。然而,活细胞中这一探针仅呈现pH依赖的双发射光谱(发射波长比率~450/510 nm,激发波长~365 nm)。在酸性细胞器中,LysoSensor Yellow/Blue DND-160主要呈现黄色荧光,而在酸性偏低的细胞器中具有蓝色荧光。双发射波长的测定允许比率成像分析在酸性细胞器比如:溶酶体或精子顶体内的pH。其pKa值约为4.2LysoSensor Yellow/Blue DND-160,常常简写成PDMPO,普遍用作海洋硅藻中二氧化硅沉积和运输的一种示踪剂。

image.png

Fig 1. LysoSensor Yellow/Blue DND-160pH依赖性光谱反应图(A)荧光激发光谱(B)荧光发射光谱。

本品为DMSO储存液,浓度为1mM。用于活细胞的溶酶体染色,建议工作浓度为1µM,需根据实际情况做优化调整。

产品特征

1) 外观:溶液

2) 浓度:1mM in DMSO

3) 亚细胞定位:溶酶体

4) 颜色:黄色、蓝色

5) 检测仪器:荧光显微镜

6) Absnm329384nm [双吸收波长,对pH敏感,见Fig 1]

7) Emnm):440540nm [双发射波长,对pH敏感,见Fig 1]


保存与运输方法

保存:-20ºC避光干燥保存,收到货至少12个月有效。

运输:冰袋运输。

注意事项

1) 整个染色过程中需注意避光。

2) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

使用前,先将本品取出回温至室温,并对其进行简单低速离心使溶液降至管底。第一次使用请将本品按单次用量分装保存,-20°C避光干燥保存,尽量避免反复冻融。工作浓度需根据不同的实验要求、细胞类型、细胞或组织的膜通透性等进行优化。

1. 工作液的配制
利用生长培养基或合适的缓冲液将 1mM 储存液稀释至工作浓度,工作液需现配现用。对于 Lysosensor系列溶酶体探针,推荐工作液浓度1µM
【注意】:

1)为了降低探针加载过度可能引起的假阳性,建议在不影响染色效果的情况下尽量使用低浓度。

2)若细胞在染色后于不含染料的培养基中孵育,会观察到荧光信号的衰减和细胞的空泡化现象。

2. 染色步骤(贴壁细胞)
1)将细胞置于培养皿中的盖玻片上,加入合适培养基,使其爬片生长。
2)待细胞生长到合适密度,吸除培养液,加入适量 37℃预热的含探针培养基(必须完*-全覆盖住细胞),在适合特定细胞类型的生长条件下孵育细胞30min-2h(具体孵育时间需根据细胞类型而定)。
3)利用不含探针的新鲜培养基替换上述染色液,并且用装有合适滤片的荧光显微镜进行观察。若染色不够充分,建议增加染料浓度或延长染色时间,使得染料能聚集在溶酶体上

3. 染色步骤(悬浮细胞)
1)离心沉淀细胞,吸除上清。
2)利用适量 37℃预热的含探针培养基重悬细胞,在适合特定细胞类型的生长条件下孵育细胞30min-2h(具体孵育时间需根据细胞类型而定)。
3)离心,吸除染色液,加入新鲜培养基重悬细胞。
4用装有合适滤片的荧光显微镜进行观察。若染色不够充分,建议增加染料浓度或延长染色时间,使得染料能聚集在溶酶体上
注意】:

另一种方法,悬浮细胞可能会粘附到 BD Cell-Tak 处理的盖玻片上,此时,可用类似于贴壁细胞的方法进行染色


附录I 溶酶体探针总表

货号

名称

Abs (nm)[1]

Em(nm)[1]

pKa

MX4320-50UL

LysoTracker Blue DND-22 蓝色

373

422

N/A

MX4318-50UL

LysoTracker Green DND-26 绿色

504

511

N/A

MX4317-50UL

LysoTracker Red DND-99 红色

577

590

N/A

MX4319-50UL

LysoTracker Deep Red 远红

647

668

N/A

MX4316-50UL

LysoSensor Yellow/Blue DND-160 /蓝色

329384[2]

440540[2]

4.2

MX4321-50UL

LysoSensor Green DND-189 绿色

443

505

5.2

[1]:在水溶性缓冲液或甲醇中测定的吸收和发射波长;在细胞环境内数值可能会有些许差异。

[2]:双吸收和发射波长,对pH敏感。

溶酶体系列探针常见问题

1. 如何选择合适的溶酶体探针?

答:对于溶酶体定位实验,请选择Lysotracker系列探针,根据自身的实验体系,结合lysotracker系列探针的荧光特征,选择合适激发和发射波长的荧光探针。Lysotracker Blue DND-22MX4320-50UL)探针的光量子产率偏低,建议在非荧光选择受限的情况下,推荐选择其他几款Lysotracker探针。对于酸性细胞器(比如溶酶体)的pH测定实验,请选择Lysosensor系列探针。

2. 溶酶体探针染色后是否能做固定?

3. 溶酶体探针是否能用于流式分析和荧光光度计分析?

4. 溶酶体探针LysoTracker Green DND-26MX4318-50UL LysoSensor Yellow/Blue DND-160

MX4316-50UL)的建议孵育时间多少?

 

LysoSensor 黄/蓝色溶酶体荧光探针     

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