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ATCC农杆菌电转感受态细胞 表达分析

ATCC农杆菌电转感受态细胞 表达分析

简要描述:

ATCC农杆菌电转感受态细胞 表达分析表达分析 ATCC15834电转感受态细胞经特殊工艺制作,特别适合大质粒的转化。基因型为Agrobacterium rhizogenes pRi15834 (agropine type),经pCAMBIA2301质粒(卡那mei素抗性)检测转化效率>105 cfu/μg DNA。

产品时间:2024-03-14

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ATCCElectrocompetent Cell

农杆菌电转感受态细胞

产品标签

ATCCMSU440Ar 1193Ar A4K599C58C1Agrobacterium rhizogenes 发根农杆菌pCAMBIA2301;Streptomycin 链mei素;Rifampicin利fu平;


产品订购:

货号

产品名称

规格

价格(元)

MF2466-0500UL

ATCC Electrocompetent Cell 农杆菌电转感受态细胞

10×50μl

720

MF2466-2500UL

ATCC Electrocompetent Cell 农杆菌电转感受态细胞

50×50μl

3000





产品描述

发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)是根瘤菌科农杆属的一种革兰氏阴性土壤细菌,能够侵染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。起关键作用的是其携带的Ri质粒,含有负责发根自主性生长和冠瘿碱合成的基因。结构上与Ti质粒类似,主要有致毒区(Vir),T-DNA区以及冠瘿碱合成功能区等。

根据合成冠瘿碱的不同,Ri质粒分为4种类型:1)甘露碱型;2)黄瓜碱型;3)农杆碱型;4)米奇矛型。

发根农杆菌菌株ATCC来源于American type culture collection (ATCC),为发根农杆菌原始菌株。ATCC含pRi农杆碱型Ri质粒,具有广泛的宿主范围(禾本科,豆科,烟草等),特别适合对zi杉醇,青蒿等药用植物毛状根的诱导。


我司提供ATCC电转感受态细胞经特殊工艺制作,特别适合大质粒的转化。基因型为Agrobacterium rhizogenes pRi (agropine type),pCAMBIA2301质粒(卡那mei素抗性)检测转化效率>105 cfu/μg DNA。


产品包装

组分编号

组分名称

货号(规格)

MF2466-0500UL

MF2466-2500UL

MF2466-A

ATCC Electrocompetent Cell

10×50μl

550μl

MF2466-B

pCAMBIA2301 Control Vector (10ng/μl)

10μl

10μl



注意事项

  • 感受态细胞应保存在-80,不可反复冻融和放置时间过长,以免降低感受态细胞的转化效率。

  • 整个转化操作,严格根据相应温度及无菌条件要求进行。

3) 加入质粒的体积不应大于感受态体积的1/10。质粒不纯或存在乙醇等有机物污染,会导致转化效率急剧下降。质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。

  • 为确保高转化效率,整个操作过程应尽量轻柔,并保持低温。

5) 电转感受态细胞中不可混入气泡,转化高浓度的质粒可相应减少终涂板用量。

6) 平板上克隆密度过大时,由于营养不足,克隆生长变慢,菌落变小。为获得大菌落,应减少质粒用量。

7) ATCC生长缓慢,转化质粒后的ATCC涂布在含抗生素的平板上应生长72h。

8) 为了保证加的转化效率,发根农杆菌的培养建议使用TY培养基(配方见附表1)。

9) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


使用方法

  • 将0.1 cm电基杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净吸水纸上5min,待其沥干水分,正置5min,使乙醇充分挥发干净,立即插入冰中,压实冰面,电极杯顶离冰面0.5cm以方便盖上杯盖,冰中静置5min使其充分降温。


  • 取-80保存的农杆菌感受态细胞插入冰中5min,待其*融化。

  • 往50μl感受态细胞悬液中加入0.01~1μg(体积不大于6μl)质粒DNA,用手拍打管底使其混匀,立即插入冰中。用枪轻轻吹打混匀感受态细胞-质粒之后快速转移到电基杯中,盖上杯盖,空管保留待用【注意:质粒DNAhao用试剂盒抽提,且用双蒸水溶解。由于感受态转化效率较高,*次使用hao做预试验确定加的质粒用量】。

  • 启动电转仪,设置参数:C=25 μF,PC=200 ohm,V=2400 V(此参数参考Bio-rad,具体使用请参考电转仪推荐步骤来操作),将电基杯从冰中取出,吸水纸吸干外表面水分,快速放入电转槽中,启动电基,电基完成快速插入冰中。

  • 加入1ml无抗生素的TY并转移到感受态空管中,于28振荡培养2~3h。

6) 6,000rpm离心1min,留取 100ul左右上清,之后用枪轻轻吹打重悬菌体。之后加到含相应抗生素的TY平板上,用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min,待液体被吸收后,倒置平板,28培养72h


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附表1 固体和液体TY培养基配方

组分Component

TY(液体)/升

TY(固体)/升

胰蛋白胨 Tryptone

5g

5g

酵母提取物 Yeast extract

3g

3g

琼脂 Agar

/

15g


补水到1L,121℃,20min高压灭菌

补水到1L,121℃,20min高压灭菌

氯化钙 CaCl2

配制1M CaCl2水溶液,121℃,20min高压灭菌。之后按照10ml/L加入上方灭菌的液体营养液。

配制1M CaCl2水溶液,121℃,20min高压灭菌。之后按照10ml/L加入上方灭菌的液体营养液。


附表2 固体和液体YMB培养基配方

组分Component

YMB(液体)/升

YMB(固体)/升

酵母提取物 Yeast extract

1g

1g

MgSO4·7H2O

0.2g

0.2g

K2HPO4

0.5g

0.5g

NaCl

0.1g

0.1g

甘lu醇

10g

10g

琼脂 Agar

/

15g


补水到1L,*溶解后,调pH至7.0,121℃,20min高压灭菌

补水到1L,*溶解后,调pH至7.0,121℃,20min高压灭菌


附表3常见发根农杆菌对抗生素敏感性总表


附表4 ATCC菌株质粒转化筛选抗生素使用浓度

抗生素

配方

筛选培养基

母液

工作液

硫酸卡那mei素

去离子水溶解,0.22μm滤膜除菌

YMB 或 TY

100mg/ml

100μg/ml

壮观mei素

去离子水溶解,0.22μm滤膜除菌

TY

50mg/ml

70μg/ml


— —Written/Edited by V. Shallan


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ATCC农杆菌电转感受态细胞 表达分析

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