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大肠杆菌化学感受态细胞 表达分析

大肠杆菌化学感受态细胞 表达分析

简要描述:

大肠杆菌化学感受态细胞 表达分析 大肠杆菌OverExpress C43(DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达5×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

产品时间:2024-03-14

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OverExpress C43(DE3) Chemically Competent Cell

大肠杆菌化学感受态细胞


产品标签

OverExpress C43(DE3)C43(DE3) pLysSBL21 (DE3)OverExpress C41(DE3)表达感受态细胞;毒性蛋白表达;pET表达载体;


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货号

产品名称

规格

价格(元)

MF2342-1000UL

OverExpress C43(DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

10×100μl

396

MF2342-5000UL

OverExpress C43(DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

50×100μl

1696


菌株描述

OverExpress C41(DE3)C41(DE3) pLysSC43(DE3)C43(DE3) pLysS都是大肠杆菌(E. Coli)菌株,有效表达不同物种有机生物体包括细菌、酵母菌、植物、病毒和哺乳动物来源的毒性蛋白。

OverExpress C43(DE3)菌株来源于OverExpress C41(DE3)菌株,通过筛选OverExpress C41(DE3)对另一个不同毒性蛋白的抗性菌株而获得。OverExpress C41(DE3)来源于BL21(DE3),此菌株含一个突变,能降低T7 RNA聚合酶(T7 RNAP)的水平,从而预防许多重组毒性蛋白过表达引起的细胞死亡。OverExpress C43(DE3)与OverExpress C41(DE3)相比,至少携带另一个不同突变,使其获得更广泛更高的毒性蛋白表达能力。

OverExpress C43(DE3)菌株含DE3区,表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体(其上携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因),适用于靶基因克隆进入T7启动子表达载体比如pET系列的蛋白生产。

OverExpress C43(DE3)菌株基因型:FompT hsdSB (rB- mB-) gal dcm (DE3)


产品描述

品是大肠杆菌OverExpress C43(DE3)菌株特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达5×108 cfu/μg DNA。且在-80能稳定保存几个月转化效率不发生改变


产品包装

组分编号

组分名

货号(规格)

MF2342-1000UL

MF2342-5000UL

MF2342-A

OverExpress C43(DE3) Competent Cell

10×100μl

50×100μl

MF2342-B

Control Plasmid puC19, 10pg/μl

10μl

10μl


注意事项

1) 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。

2) hao在冰上融化感受态细胞,不可在冰上放置时间过长,长时间存放会降低转化效率

3) 进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。

4) 为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到低。

5) 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用

6) 转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。

7) 诱导时,IPTG浓度范围可选:0.1~2mM

8) 为了得到足量的蛋白,需就加诱导时间、温度、IPTG浓度进行优化。

9) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1) 从-80冰箱取出取感受态细胞,迅速置于冰浴中,5min后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物),用手轻弹管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰浴静置25min。

2) 42水浴热激45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。

3) 向每个离心管中加700 μl无菌的2YT或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37 摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

4) 低速离心收菌(比如5000rpm,1min),留取100μl左右上清,用枪轻轻吹打重悬菌块,之后加到筛选抗生素2YT或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37)直至液体被吸收,倒置培养,37培养过夜

【注意】:

a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可不用离心,直接取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,则通过离心(5000 rpm,1min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37直至液体被吸收后再倒置培养。

c)涂布剩余的菌液可置于4保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。


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10×100μl

MS0021-10G

Chloramphenicol, USP Grade 氯mei素

10g

MS0018-10G

Ampicillin, Sodium Salt 氨苄青mei素钠

10g

MS0017-5G

Carbenicillin, Disodium Salt 羧苄青mei素二钠盐

5g

MS0019-10G

Kanamycin Sulfate 硫酸卡那mei素

10g

MS0014-1G

Rifampicin, USP Grade 利fu平

1g

MF2002-1G

IPTG 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷

1g


附录I 蛋白诱导步骤(仅作参考)

1)从新鲜涂布平板上挑取一单克隆,转移到含相应抗生素的5ml LB液体培养基内。

2)37℃摇菌培养过液。为了小化诱导前目的蛋白的小化表达,添加葡萄糖(终浓度为0.2% w/v)到生长培养基内。

3)将步骤2)中过夜培养的菌液吸取0.5ml接种到含相应抗生素的50ml LB液体培养基内。

4)37℃摇菌培养直至OD600达到0.6~0.8。

5)加入IPTG使其终浓度为1mM。目的蛋白的加诱导时间可能在2~16h,依蛋白而异。

6)37℃培养3~4h。为了确定目的蛋白的加诱导时间,建议作一个时间周期优化实验,范围从2~16h。

7)将培养物冰浴10min。4℃,5,000 x g离心10min收集菌株。

8)吸掉上清,将沉淀保存在-20℃(也能保存在更低的温度)。


IPTG母液(1M)配制

称量2.38g IPTG(Mw: 238.30)溶于适量去离子水,充分溶解后,调整终体积到10ml,并过滤除菌,即得到1M ITPG母液。


— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】


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大肠杆菌化学感受态细胞 表达分析

大肠杆菌化学感受态细胞 表达分析


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