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Y190酵母化学感受态细胞

Y190酵母化学感受态细胞

简要描述:

Y190酵母化学感受态细胞:是GAL4系统酵母双杂交用实验菌株,MATa型,能直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187通过接合(mating)操作进行蛋白相互作用验证或筛库实验。转化标志为trp1,leu2,cyh2。报告基因为lacZ,HIS3,MEL1。

产品时间:2019-03-24

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Y190 Chemically Competent Cell

酵母菌化学感受态细胞

温馨提示

见我司(懋康生物)整理的酵母双杂交(Yeast two-hybrid assay产品专题。

 

产品关键词:

Y190-GAL4酵母单杂交系统Y1HGoldpGBKT7pGADT7Ar QualX-α-GalAureobasidin A AbA);金担子素;

 

产品订购:

货号

产品名称

规格

价格(元)

MF2364-1000UL

Y190 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

10×100μl

290

MF2364-5000UL

Y190 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

50×100μl

1320

 

产品组分:

组分编号

组分名称

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货号(规格)

MF2364-1000UL

MF2364-5000UL

MF2364-A

Y190 Chemically Competent Cell

-80

10×100μl

50×100μl

MF2364-B

pGADT7 Control Vector (10ng/μl)

-80

10μl  

10μl  

MF2364-C

Carrier DNA (10μg/μl)

-20

100μl 

500μl 

MF2364-D

PEG/LiAC Solution

+4

5ml

25ml

 

产品描述

Y190GAL4系统酵母双杂交用实验菌株,MATa型,能直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187通过接合(mating)操作进行蛋白相互作用验证或筛库实验。转化标志为trp1leu2cyh2。报告基因为lacZHIS3MEL1Y190-GAL4酵母双杂交系统需要两种质粒配套使用,pGB&pACT2pGBKT7& pGADT7pGB由或pGBKT7改造而来,筛选标志为Trp,用于表达DNA-BD与诱饵蛋白(bait)的融合蛋白;pACT2pGADT7的结构和功能类似,筛选标志为Leu,用于表达AD与诱捕蛋白(prey)的融合蛋白。

本品为经特殊工艺制备的Y190酵母菌化学感受态细胞,用pGADT7质粒检测转化效率>104cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存三个月。

基因型

MATa, ura3-52, his3-200, ade2-101, lys2-801, trp1-901, leu2-3, 112, gal4Δ, gal80Δ, cyhr2, LYS2 : : GAL1 UAS-HIS3TATA-HIS3, MEL1 URA3 : : GAL1UAS-GAL1TATA-lacZ

注意事项

  1. 最号在冰上融化感受态细胞。
  2. 转化高浓度质粒可相应减少用于涂板的菌量。同时转化2-3种质粒可适当增加质粒的用量。
  3. Y190对高温敏感,最适生长温度为27-30℃,一旦高于31℃,生长速度和转化率都呈指数下降。
  4. 菌落变粉红色并不是污染,而是酵母细胞生长中的一种常见现象。当酵母细胞在平板上培养几天,将平板内的腺嘌呤消耗殆尽,那时酵母试图通过自身代谢途径合成腺嘌呤以供利用。然而,某些菌株ADE2基因被破坏,腺嘌呤合成受阻。且ADE45678基因均正常。由此,造成中间产物P-ribosylamino imidazoleAIR)在细胞的积累使得菌落变为粉红色。
  5. 酵母菌在缺陷培养基上生长速度比YPDA培养基慢,营养缺陷成分越多,生长越慢,以转化涂板为例:涂YPDA平板于29℃,48h培养可见直径1mm克隆;涂SD单缺平板于29℃,48-60h培养可见直径1mm克隆;涂SD双缺平板于29℃,60-80h培养可见直径1mm克隆;涂SD三缺或四缺平板于29℃,80-90h培养可见直径1mm克隆;
  6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

  1. Carrier DNA于使用前通过加热处理使其变性为单链状态,方法如下:95-100 水浴或金属浴3min,快速插入冰中,静置3min。重复一次。
  2. 100 µl冰上融化的Y190化学感受态细胞,依次加入预冷的目的质粒0.5-3 µg,单链Carrier DNA 10 µlPEG/LiAc 500µl,用枪吹打几次充分混匀,30水浴30 min(在15min时翻转6-8次混匀)。
  3. 之后将管子放42水浴15 min(在7.5min时翻转6-8次混匀)。
  4. 5000 rpm离心40s弃上清,用400 µl ddH2O重悬沉淀,离心30s弃上清。
  5. 50 µl ddH2O重悬,涂板,放入29培养48-96 h

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

 

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作,主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承以人为本,以诚为信、合同守信的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。

 

Y190酵母化学感受态细胞

Y190酵母化学感受态细胞

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