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NMY51酵母感受态细胞

NMY51酵母感受态细胞

简要描述:

NMY51酵母感受态细胞:双膜系统利用NMY51酵母菌,能直接转化质粒进行蛋白突变验证或筛库实验。转化标志为TRP1,leu2-3。报告基因为HIS3,ADE2和LacZ。NMY51的选择性生长筛选通过营养缺陷报告基因(HIS3,ADE2)进行,之后通过LacZ报告基因进行β-半乳糖分析的定量或半定量筛选,三个独立的报告基因由不同的启动子调控,有助于降低假阳性几率。

产品时间:2019-03-24

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NMY51 Chemically Competent Cell

酵母菌化学感受态细胞

 

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见我司(懋康生物)整理的酵母双杂交(Yeast two-hybrid assay产品专题。

产品关键词:

Dualmembrane system 双膜系统Dualsystems BiotechY1HGoldpBT3-STEpPR3-STENMY51X-α-GalAureobasidin A AbA);金担子素;

 

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货号

产品名称

规格

价格(元)

MF2360-1000UL

NMY51 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

10×100μl

290

MF2360-5000UL

NMY51 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

50×100μl

1320

 

产品组分:

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货号(规格)

MF2360-1000UL

MF2360-5000UL

MF2360-A

NMY51 Chemically Competent Cell

-80℃

10×100μl

50×100μl

MF2360-B

pGADT7 Control Vector (10ng/μl)

-80℃

10μl  

10μl  

MF2360-C

Carrier DNA (10μg/μl)

-20℃

100μl 

500μl 

MF2360-D

PEG/LiAC Solution

+4℃

5ml

25ml

 

产品描述

双膜系统(Dualmembrane system)是由Dualsystems Biotech公司开发的专门筛选跨膜蛋白间相互作用的筛选技术,该技术利用分离的泛素系统直接检测天然状态下膜蛋白间的相互作用,是目前为止为一用来检测膜蛋白间相互作用的酵母双杂交系统。

双膜系统利用NMY51酵母菌,能直接转化质粒进行蛋白突变验证或筛库实验。转化标志为TRP1leu2-3。报告基因为HIS3ADE2LacZNMY51的选择性生长筛选通过营养缺陷报告基因(HIS3ADE2)进行,之后通过LacZ报告基因进行β-半乳糖分析的定量或半定量筛选,三个独立的报告基因由不同的启动子调控,有助于降低假阳性几率。

双膜系统的工作原理在于:泛素分子量很小,由76个氨基酸残基组成。泛素作为降解信号分子,能够连接另一个蛋白的N端,之后被泛素专一性蛋白酶(ubps)识别,导致与泛素相连蛋白被酶降解。泛素可人为分成两个部分:N端(Nub)和C端(Cub)。首先,将泛素Nub的三位异亮氨酸突变成甘氨酸(Nubi突变为NuBG),通过这种方式Cub的亲和力明显降低,避免CubNub自我结合或靠近的可能性。其次,Cub与合成的LEXA-VP16转录激活因子融合成融合蛋白Cub-lexa-vp16。正常情况下,NuBG不与Cub结合,ubps也不能识别分离的泛素,转录激活因子也不会被切下来。最后,将待测蛋白分别与NuBGCub融合,形成bait融合蛋白(bait-cub-lexa-vp16)和prey融合蛋白(prey-NuBG)。如果baitprey发生相互作用,促使NuBGCub的相互接近,从而被ubps识别,导致LEXA-VP16的解离,进入核内,进而激活报告基因的转录。该系统能使用四种Bait质粒:pBT3-NpBT3-SUCpBT3-STEpBT3-C,筛选标志是Leu。三种prey质粒:pPR3-C pPR3-SUCpPR3-STE,筛选标志是Trp

本品为经特殊工艺制备的NMY51酵母菌化学感受态细胞,用pGADT7质粒检测转化效率>104cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存三个月。

基因型

MATa, his3Δ200, trp1-901, leu2-3, 112, ade2, LYS2::(lexAop)4-HIS3, ura3::(lexAop)8-lacZ, ade2::(lexAop) 8-ADE2, GAL4

使用方法

1. Carrier DNA于使用前通过加热处理使其变性为单链状态,方法如下:95-100 水浴或金属浴3min,快速插入冰中,静置3min。重复一次。

2. 取100 µl冰上融化的NMY51化学感受态细胞,依次加入预冷的目的质粒2-5 µg,单链Carrier DNA 10 µlPEG/LiAc 500µl,用枪吹打几次充分混匀,30水浴30 min(在15min时翻转6-8次混匀)。

3. 之后将管子放42水浴15 min(在7.5min时翻转6-8次混匀)。

4. 5000 rpm离心40s弃上清,用400 µl ddH2O重悬沉淀,离心30s弃上清。

5. 用50 µl ddH2O重悬,涂板,放入29培养48-96 h

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货号

名称

规格

MF2351-300UL

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300μl

MF2352-1000UL

Y2HGold Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

10×100μl

MF2353-300UL

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300μl

MF2354-1000UL

Y187 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

10×100μl

MF2355-300UL

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300μl

MF2356-1000UL

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10×100μl

MF2357-300UL

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MF2358-1000UL

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10×100μl

MF2359-300UL

NMY51 Yeast Strain  酵母双杂交用甘油菌

300μl

MF2360-1000UL

NMY51 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

10×100μl

MF2363-300UL

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300μl

MF2364-1000UL

Y190 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

10×100μl

MF2501-200T

Yeast Transformation Kit 酵母转化试剂盒

200T

 

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

 

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NMY51酵母感受态细胞

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