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D-Luciferin Firefly Free Acid

D-Luciferin Firefly Free Acid

简要描述:

D-Luciferin Firefly Free Acid D-荧光素游离酸 荧光探针与细胞染色,是荧光素酶(Luciferase)的常用底物,普遍用于整个生物技术领域,特别是体内活体成像技术。作用机制是在ATP和荧光素酶的作用下,D-荧光素(底物)被氧化发光。当荧光素过量时,产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性。

产品时间:2024-03-21

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D-Luciferin Firefly, Free Acid D-萤火虫荧光素(游离酸)

 

搜索关键词:

D-荧光素(D-Luciferin);Luc报告基因底物;萤火虫荧光素酶Firefly luciferase;D-荧光素钾盐;D-荧光素钠盐;生物发光成像技术(Bioluminescence imaging,BLI);Luminometer荧光计;CAS NO:2591-17-5;

 

基本描述:

D-荧光素(D-Luciferin)是荧光素酶(Luciferase)的常用底物,普遍用于整个生物技术领域,特别是体内活体成像技术。作用机制是在ATP和荧光素酶的作用下,D-荧光素(底物)被氧化发光。当荧光素过量时,产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性(见下图)。将携带荧光素酶编码基因(Luc)的质粒转染进入细胞后,导入研究动物如大小鼠体内,之后注入荧光素,通过生物发光成像技术(BLI)来检测光强度变化,从而实时监测疾病发展状态或药物的治疗功效等。也可以利用ATP对此反应体系的影响,根据生物发光强度的变化来指示能量或生命体征。

D-荧光素也常用于体外研究,包括荧光素酶和ATP水平分析;报告基因分析;高通量测序和各种污染检测。目前市场上有三种产品形式,D-荧光素(游离酸),D-荧光素(钠盐),和D-荧光素(钾盐)。这三种产品主要差别在于溶解特性。D-荧光素(游离酸)在水以及缓冲体系内的溶解性都很弱,除非溶于弱碱如NaOH和KOH溶液。溶于甲醇(10 mg/ml)和DMSO(50 mg/ml)。但钠盐和钾盐形式的D-荧光素能够非常容易且快速的溶入水或者缓冲液中,使用方便,溶剂无毒性,特别适合体内实验。配成溶液后的三种产品,在绝大多数应用上都没有实质性的差别。

 

基本特性:

1)  CAS NO:2591-17-5

2)  化学名:(S)-4,5-Dihydro-2-(6-hydroxy-2-benzothiazolyl)-4-thiazolecarboxylic acid; D-Luciferin Firefly, free acid D-萤火虫荧光素游离酸,D-甲虫荧光素游离酸;

3)  分子式:C11H8N2O3S2

4)  分子量:280.32 g/mol

5)  纯度:>99% (HPLC)

6)  外观:类白色至浅黄色粉末

7)  溶解性:溶于甲醇(10 mg/ml)和DMSO(50mg/ml),溶于弱碱,微溶于水

8)  化学结构图:

 

注意事项

1)萤火虫荧光素(firefly luciferin)和甲虫荧光素(beetle luciferin)皆相同化合物,即:(S)-2-(6-Hydroxy-2- benzothiazolyl)-2-thiazoline-4-carboxylic acid,仅不同公司在命名上的差异。

2)萤火虫荧光素(firefly luciferin)在保存和操作的过程中需要避光。另,水溶性储存液经过滤除菌后,可置于-20℃或-80℃分装冻存,避免反复冻融。若条件允许,对储存液充氮气或氩气(防止氧化),稳定性和保存时间更长,长达1年。

3)萤火虫荧光素(firefly luciferin)的注射方式,以及动物类型、体重等都会影响荧光信号发射,建议每次实验都要做荧光素酶动力学曲线,确定zuijia信号平台期和zuijia检测时间。

4)紫外线和潮气会产生脱氢荧光素,是一种荧光素酶的竞争性抑制剂。因此需小心保存和处理D-荧光素。-20℃避光干燥保存。

5)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

使用方法

A.体外生物发光检测

1. 储存液制备

【注意】:建议大量实验前先取少量原料(D-荧光素游离酸)溶于你的缓冲液,以测试其溶解性。

【配置方法】:要溶解萤火虫荧光素游离酸到生理盐中,首先用NaOH或KOH调整缓冲液到预测的摩尔碱度,然后加入D-荧光素游离酸(如15mg/ml),边搅拌边促进溶解。如果仍有沉淀,调整pH到更高直至*溶解。zui后用酸调整pH到所需值。混匀后立即使用或分装于-80℃避光冻存,避免反复冻融。

2. 荧光素酶反应缓冲液制备

2.1 配方【1×,参考Yuichi Oba, et al., 2003】:100mM Tris-HCl(pH 7.8),5mM MgCl2,250µM CoA,150µM ATP。具体缓冲液组成可参考其他文献资料来调整。按照以上配方制备荧光素酶反应缓冲液(2×)。

3. 收集细胞裂解上清(荧光素酶表达)

根据需要检测的细胞类型,选择合适的裂解液进行细胞裂解,离心收集上清后续检测待用。

4. 萤火虫荧光信号检测

【注①】:萤火虫荧光信号的检测方法大体上取决于冷光测定仪(luminometer)类型(是手动型荧光计、单管注射型或者酶标板读数型荧光计)。根据特定发光测定仪,来考虑注射用量和程序设置。

【注②】:需设置不含荧光素酶的孔(用作阴性对照),以测定背景荧光。

例:注射式冷光测定仪(injectible luminometer,单样或微孔板,200µl终体积)

a)吸取100µl荧光素酶反应缓冲液(2×)到一干净的冷光测定仪比色皿或96孔板的各孔(使用全白平底的96孔板);

b)吸取50~98µl裂解上清到皿或孔内;

c)如果有需要,用水来补足使得总体积到198µl;

d)设置程序注射2µl荧光素储存液(使工作浓度150µg/ml),程序:2~5秒延迟(delay),之后10s测定。

 

B.活体成像分析

1)工作液准备:准备少量的PBS(w/o Mg2+), pH=12以及PBS(w/o Mg2+), pH=2缓冲液。先取10mg D-荧光素游离酸到165ml PBS(w/o Mg2+), pH=12,充分溶解后,再加入165ml PBS(w/o Mg2+), pH=2中和溶液,混匀得到30mg/ml的工作液。0.2µm滤膜过滤除菌。混匀后立即使用或分装于-80℃避光冻存,避免反复冻融。一旦使用,放到4℃解冻,保持冰冷且避光。

2)注射方式:适用于静脉注射,腹腔注射,肌肉注射和鼻内注射等,根据具体方式调整注射体积,zui常用的注射浓度为150mg/kg体重。

3)检测方式:注射入体内10-20 min(待光信号达到zui强稳定平台期),再进行成像分析。

【注意】:建议对每只动物模型都需要建立荧光素酶动力学曲线,从而确定zui高信号检测时间和信号平台期。

 

 

货号

产品名称

规格

价格(元)    

MX4601-250MG       

D-Luciferin Firefly, Free Acid D-萤火虫荧光素(游离酸)   

250mg        

1800

MX4601-500MG

D-Luciferin Firefly, Free Acid D-萤火虫荧光素(游离酸)

500mg

3000

MX4601-1000MG

D-Luciferin Firefly, Free Acid D-萤火虫荧光素(游离酸)

1g

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DMNPE-caged Luciferin D-荧光素(DMNPE笼闭)

50mg

5440

 

注意事项

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】 

 

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作,主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本,以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。

 

D-Luciferin Firefly Free Acid D-荧光素游离酸 荧光探针与细胞染色

D-Luciferin Firefly Free Acid D-荧光素游离酸 荧光探针与细胞染色

 

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