酵母菌化学感受态细胞 表达分析

INVSc1 Chemically Competent Cell  

酵母菌化学感受态细胞

产品信息

产品包装

保存与运输方法

保存：其中感受态细胞按标签注明置于-80℃保存，三个月有效。其他组分按照标签注明保存，一年有效。

运输：干冰运输。

产品描述

INVSc1菌株是一种快速生长的酿酒酵母菌，是一款非常理想的重组蛋白表达菌株，但因孢子生成能力弱，不适合用于基因分析研究。配套的质粒有：pYES3/CT、pYC 2、pYES2系列。当这些质粒（比如：pYES2）与INVSc1菌配套使用，会激活pYES2质粒上的GAL1启动子的转录，进而启动下游重组蛋白的表达。INVSc1是二倍体细胞，是组氨suan、亮氨suan、色氨suan、尿mi啶缺陷型菌株，可直接通过PEG/LiAc将pYES2质粒转化进入INVSc1细胞内。质粒pYES2的筛选标志为URA，可用SD-URA平板进行筛选。

本品为经特殊工艺制备的INVSc1酵母菌化学感受态细胞，用pYES2质粒检测转化效率＞104 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存三个月。

基因型

MATa his3Δ1 leu2 trp1-289 ura3-52/MATα his3Δ1 leu2 trp1-289 ura3-52

注意事项

1） 最好在冰上融化感受态细胞。

2） 转化高浓度质粒可相应减少用于涂板的菌量。同时转化2-3种质粒可适当增加质粒的用量。

3） INVSc1对高温敏感，最适生长温度为27-30℃，一旦高于31℃，生长速度和转化率都呈指数下降。

4） 酵母菌在缺陷培养基上生长速度比YPDA培养基慢，营养缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板于29℃，48h培养可见直径1mm克隆；涂SD单缺平板于29℃，48-60h培养可见直径1mm克隆；涂SD双缺平板于29℃，60-80h培养可见直径1mm克隆；涂SD三缺或四缺平板于29℃，80-90h培养可见直径1mm克隆；

5） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1） 取100 µl冰上融化的INVSc1化学感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5 µg，预处理的Carrier DNA（95-100℃水浴3 min或95℃金属浴5min，快速冰浴3min。重复一次。处理完快速插入冰中，待用。）10 µl，PEG/LiAc 500µl，用枪吹打几次充分混匀，30℃水浴30 min（在15min时翻转6-8次混匀）。

2） 之后将管子放42℃水浴15 min（在7.5min时翻转6-8次混匀）。

3） 5000 rpm离心40s弃上清，用400 µl ddH2O重悬沉淀，离心30s弃上清。

4） 用50 µl ddH2O重悬，涂板，放入29℃培养48-96 h。 

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附录I培养基配制

一、质粒筛选用培养基：SD/-Ura培养基配制（1L）

酵母氮源基础（YNB）                 6.7g

葡萄糖                               20g

氨基酸缺陷混合物（DOsupplement-Ura for pYES2）      适量（详见说明书）

补水到1L，用1M NaOH调pH至5.8。

琼脂粉（Agar）                       20g（仅限固体培养基）

121℃，15min高压灭菌。

二、蛋白诱导用培养基：SGR/-Ura培养基配制（1L）

酵母氮源基础（YNB）                 6.7g

氨基酸缺陷混合物（DOsupplement-Ura for pYES2）      适量（详见说明书）

补水到800 mL，用1M NaOH调pH至5.8。

121℃，15min高压灭菌。

待培养基温度冷却到55℃左右，加入已过滤的碳源：100ml 20%半乳糖，100m 10%棉子糖。混匀即可。

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

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