大肠杆菌化学感受态细胞表达分析

DH5α λpir Chemically Competent Cell

 大肠杆菌化学感受态细胞

产品订购：更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询，

菌株描述

DH5α λpir菌株来源于DH5α，在DH5α菌株的基因组中引入λpir，使得菌株可以表达PIR蛋白，让含R6Kg ori复制子的质粒得以正常复制。DH5α λpir菌株缺失核酸内切酶 （endA1），提高了质粒DNA的产量和质量；重组酶缺陷型 （recA1）减少插入片段的同源重组概率，保证了插入DNA 的稳定性。lacZΔM15的存在使DH5α λpir可用于蓝、白斑筛选。

DH5α λpir菌株基因型：

F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) LAMpir U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 

phoA

产品描述

本品是大肠杆菌DH5α λpir菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达1×109 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

产品包装

保存与运输条件

保存：-80℃保存，六个月有效。

运输：干冰运输。

注意事项

1）   感受态细胞必须用干冰运输，感受态细胞应在-80℃保存。

2）   感受态细胞zuihao在冰上融化，不可在冰上放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

3）   进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。

4）   为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到zui低。

5）   产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。

6）   DH5α λpir菌株生长缓慢，在平板上培养或液体摇菌时都要延长菌体生长时间（37℃，18h以上）。

7）   后续进行阳性菌落的扩繁和高纯质粒的获取，推荐选用TB培养基（Terrific Broth），优于LB或SOC。

8）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1）  从-80℃冰箱取出取感受态细胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物），用手轻弹管底轻轻混匀（避免用枪吸打），冰浴静置25min。

2）   42℃水浴热激45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。

3）   向每个离心管中加700 μl无菌的LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养70min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

4）   低速离心收菌（比如5000rpm，1min），留取100μl左右上清，用枪轻轻吹打重悬菌块，之后加到含所选质粒筛选抗生素的LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养过夜（至少18h）。

【注意】：

a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可不用离心，直接取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，则通过离心（5000 rpm，1min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。原则是以在平板上能挑到单克隆菌落为宜。

b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

相关产品

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作，主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本，以诚为信、合同守信"的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。