大肠杆菌感受态细胞表达分析

BL21 (DE3) pLysS Competent Cell

大肠杆菌感受态细胞

产品标签：

BL21 (DE3)；Rosetta (DE3)；Kanamycin（kan）卡那mei素；Carbenicillin 羧苄青mei素；In-fusion 一步法克隆检测试剂盒；

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产品组分：

菌株描述

BL21 (DE3) pLysS菌株携带质粒pLysS，具有氯mei素抗性。pLysS含有表达T7溶jun酶的基因，T7溶jun 酶能够作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌，从而能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达。适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区（DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶）。

BL21 (DE3) pLysS菌株基因型：F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm(DE3)pLysS Camr

产品描述

本品是大肠杆菌BL21(DE3)pLysS菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达107 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，六个月有效。

运输：干冰运输。

注意事项

1）感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。

2）最好在冰上融化感受态细胞。

3）进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。

4）为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到zui低。

5）产品包装内含质粒pUC19 DNA(0.1ng/μl)，供对照实验用。

6）BL21(DE3)pLysS菌株携带质粒pLysS，除复苏培养基不含抗生素外，其余所用培养基/培养液均应含34μg/ml氯mei素，以防止质粒丢失。

7）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1）取感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将刚刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管内，置于冰浴中。【注意：一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl，可以根据实际情况分装使用。需注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。】以下实验以50 μl感受态细胞为例。

2）向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴静置30min。

3）42℃热击45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3min。此过程不要摇动离心管。

4）向每个离心管中加入450 μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，150 rpm振荡培养45min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

5）根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收， 倒置培养，37℃培养12-16h。

【注意】：

a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，可取200-300 μl转化产物涂布平板。若预计的克隆较少，可通过离心（4,000 rpm，2min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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