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Bradford Protein Quantification Kit  Bradford

Bradford Protein Quantification Kit Bradford

简要描述:

目前的蛋白浓度检测方法是:BCA蛋白定量试剂盒(BCA Protein Assay Kit)和Bradford蛋白定量试剂盒(Bradford Protein Assay Kit)。与蛋白浓度测定的其他方法(比如:BCA法和Lowry法)相比,Bradford法更简单、更稳定、兼容性更好。Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响,尤其是还原剂的影响。样品中β-巯基乙

产品时间:2024-06-20

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Bradford Protein Quantification Kit

Bradford蛋白浓度测定试剂盒


产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

Bradford蛋白浓度测定试剂盒

MP1903-500T

500T

135

Bradford蛋白浓度测定试剂盒

MP1903-1000T

1000T

190

Bradford蛋白浓度测定试剂盒

MP1903-2500T

2500T

410


产品描述

目前,的蛋白浓度检测方法是:BCA蛋白定量试剂盒(BCA Protein Assay Kit)和Bradford蛋白定量试剂盒(Bradford Protein Assay Kit)。与蛋白浓度测定的其他方法(比如:BCA法和Lowry法)相比,Bradford法更简单、更稳定、兼容性更好。Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响,尤其是还原剂的影响。样品中β-巯基乙醇的浓度可高达1M,DTT的浓度可高达5mM,但本法受高浓度去垢剂的影响明显,需确保SDS低于0.01%,Triton X-100低于0.05%,Tween 20、60、80低于0.015%。含高浓度去污剂的蛋白定量,建议采用BCA蛋白定量试剂盒(MP1902-500T)。


本Bradford蛋白定量试剂盒(Bradford Protein Assay Kit)的检测原理是:在酸性乙醇溶液中,考马斯亮蓝G250(Coommassie Brilliant Blue G250)与蛋白结合颜色由棕色变为蓝色,溶液的吸收峰从465nm迁移到595nm,颜色的变化与蛋白浓度成正比,因此,可通过检测595nm处的吸光度对溶液中蛋白浓度进行测定。本试剂盒检测速度很快,少量样品一般只需10min即可完成检测,检测浓度下限达到25μg/ml,最小检测蛋白量达到0.5μg,待测样品体积为1~20μl,在50~1000 μg/ml浓度范围内有较好的线性关系。


产品组分

组分编号

组分名称

产品货号(规格)

储存方法

MP1903-500T

MP1903-1000T

MP1903-2500T

MP1903-A

G250染色液

100ml

200ml

500ml

室温

MP1903-B

蛋白标准BSA

20mg

20mg

20mg

室温

MP1903-C

蛋白标准配制液

5ml

10ml

10ml

室温


保存与运输方法

保存:室温保存,1年有效。蛋白标准配制成溶液后应置于-20℃保存。

运输:室温运输。


自备材料

1. 酶标仪或分光光度计、96孔板或比色杯、离心机、离心管

2. 蒸馏水、0.9% NaCl或PBS


使用方法

1. 蛋白标准品的准备

1.1 取1ml蛋白标准配制液加入到20mg蛋白标准BSA中,充分溶解后配制成20mg/ml的蛋白标准溶液,配制后可立即使用,溶解后的蛋白标准溶液应-20℃长期保存。

1.2 取适量20mg/ml蛋白标准,稀释至终浓度为0.5mg/ml或所需浓度。例如取25μl 20mg/ml蛋白标准,加入975μl稀释液,充分混匀,即可配制成0.5mg/ml蛋白标准。【特别提示】:待测蛋白溶解于什么样的稀释液中,蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中。但为了简便起见,一般也可以用0.9%NaCl或PBS稀释标准品。稀释后的0.5mg/ml蛋白标准可以-20℃长期保存。


2. 蛋白浓度的测定

2.1 将标准品按0、1、2、4、8、12、16、20μl加到96孔板或EP管中,加标准品稀释液补足至20μl,相当于标准品浓度分别为0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/ml。

2.2 加适当体积样品到96孔板或EP管中。如果样品不足20μl,加标准品稀释液补足到20μl,需注意记录样品体积。

2.3 各孔加入200μlG250染色液,室温放置3~5min。

2.4 酶标仪或分光光度计测定595nm波长处的吸光度(OD值),如无595nm,560~610nm波长范围的吸光度也可。

2.5 根据BSA标准品的吸光度(减去标准品中空白孔的OD值即最终的读数),绘制标准曲线。依据标准曲线和使用样品体积计算样品的蛋白浓度。


注意事项

1) G250染色液回复至室温充分混匀后使用,有利于提高检测的灵敏度,加完G250染色液后,尽量在30min内完成吸光度的测定,防止沉淀形成后影响实验结果。

2) 蛋白标准在全部溶解后先混匀,再稀释成一系列不同浓度的蛋白标准。

3) 待测蛋白溶解于什么样的稀释液中,蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中,否则待测蛋白与蛋白标准所含非蛋白成分不一致,有可能导致测定不准确。

4) 建议每次测定都做标准曲线。因为测定时颜色会随着时间的延长不断加深,并且显色反应的速度和温度有关,所以除非精确控制显色反应的时间和温度,否则如需精确测定宜每次都做标准曲线。

5) 如果没有酶标仪,也可以使用普通的分光光度计测定,但应考虑根据比色杯的最小检测体积。应按比例适当加大G250染色液、样品和标准品的用量使总体积不小于最小检测体积,使用分光光度计测定蛋白浓度时,每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。

6) 用比色杯测定蛋白含量时,由于考马斯亮蓝易结合石英比色杯,应优先选用一次性塑料比色杯,如用玻璃比色杯,比色完毕后应立即用乙醇清洗干净。

7) 试剂开封后请尽快使用,以防影响后续实验效果。

8) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


相关产品

货号

名称

规格

MP1901-10ML

Bovine Serum Albumin Standard BSA标准品(5 mg/ml)

10ml

MP1902-500T

Enhanced BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型)

500T

MP1903-500T

Bradford Protein Quantification Kit Bradford蛋白浓度测定试剂盒

500T

MP1501-100ML

RIPA Lysis Buffer (Strong) RIPA裂解液(强)

100ml

MP1504-100ML

Lysis Buffer for WB/IP Assays免疫印迹及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液

100ml

 

 



— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

 Bradford蛋白浓度测定试剂盒

 Bradford蛋白浓度测定试剂盒


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