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AGL1 农杆菌电转感受态细胞

AGL1 农杆菌电转感受态细胞

简要描述:

AGL1 农杆菌电转感受态细胞:我司懋康生物提供的AGL1电转感受态细胞经特殊工艺制作,特别适合大质粒的转化。基因型C58 RecA (rifR/carbR) Ti pTiBo542DT-DNA Succinamopine,经pCAMBIA2301质粒检测转化效率>105 cfu/μg DNA。

产品时间:2024-03-26

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AGL1 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞


产品标签:

AGL1菌株;农杆菌感受态细胞;RifampicinRif 利fu平Kanamycinkan)卡那mei素; EHA101LBA4404GV3101;植物转基因研究;



货号

产品名称

规格

价格(元)

MF2310-0500UL

AGL1 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞

10×50μl

600

MF2310-2500UL

AGL1 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞

50×50μl

2400

【好消息】:见我司的感受态细胞*活动。买感受态细胞得京东卡,发表使用评论,赢红包,双重惊喜,行动起来啦。


产品描述:

AGL1菌株的染色体背景为C58RecA,核基因含利fu平抗性基因rif和羧苄青mei素抗性基因carb,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒pTiBo542DT-DNA,此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件,pTiBo542DT-DNA质粒自身的T-DNA转移功能虽被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。AGL1菌株适用于拟南芥、水稻、杨树等植物的转基因操作。

我司懋康生物提供的AGL1电转感受态细胞经特殊工艺制作,特别适合大质粒的转化。基因型C58 RecA (rifR/carbR) Ti pTiBo542DT-DNA Succinamopine,经pCAMBIA2301质粒检测转化效率>105 cfu/μg DNA


产品组分:

组分编号

组分名称

货号(规格)

MF2310-0500UL

MF2310-2500UL

MF2310-A

AGL1 Electrocompetent cell

10×50μl

50×50μl

MF2310-B

pCAMBIA2301 对照载体 (10ng/μl)

10μl

10μl


注意事项

1)   感受态细胞应保存在-80,不可反复冻融和放置时间过长,以免降低感受态细胞的转化效率。

2)   整个转化操作,严格根据相应温度及无菌条件要求进行。

3)   加入质粒的体积不应大于感受态体积的1/10。质粒不纯或存在乙醇等有机物污染,会导致转化效率急剧下降。质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。

4)   为确保zui高转化效率,整个操作过程应尽量轻柔,并保持低温。

5)   转化高浓度的质粒可相应减少zui终涂板用量。

6)   平板上克隆密度过大时,由于营养不足,克隆生长变慢,菌落变小。为获得大菌落,应减少质粒用量。

7)   利fu平浓度应≤25μg/ml,过高浓度不利于农杆菌生长,会降低其生长速度和转化效率。我司EHA101感受态计算转化效率时所用平板只含50μg/ml卡那mei素,若所用平板含20μg/ml 利fu平,则转化效率降低到1/2

8)   培养基中加入利fu平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌;根据所用菌株抗性加入Ti质粒筛选抗生素可防止Ti质粒丢失,但这些筛选抗生素不利于农杆菌的转基因操作,所以一般培养农杆菌时不考虑这些筛选抗生素,因Ti质粒丢失的概率极低(基本可以忽略)。

9)   为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


使用方法

1)        0.1 cm店击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净吸水纸上5min,待其沥干水分,正置5min,使乙醇充分挥发干净,立即插入冰中,压实冰面,电极杯顶离冰面0.5cm以方便盖上杯盖,冰中静置5min使其充分降温。

2)        -80保存的感受态细胞于室温或手心片刻待其部分融化,达到冰水混合状态时插入冰浴中使其*融化。

3)        50μl感受态细胞悬液中加入0.01~1μg(体积不大于6μl)质粒DNA,用手管底使其混匀,立即插入冰中。用枪轻轻吹打混匀感受态细胞-质粒之后快速转移到店击杯中,盖上杯盖,空管保留待用【注意:由于感受态转化效率较高,*次使用做预试验确定zui加的质粒用量】。

4)        启动电转仪,设置参数:C=25 μFPC=200 ohmV=2400 V(此参数参考Bio-rad,具体使用请参考电转仪推荐步骤来操作),将店击杯快速放入电转槽中,店击完成快速插入冰中。

5)        加入700 μl无抗生素的LB并转移到感受态空管中,于28振荡培养2~3h

6)        6,000rpm离心1min,吸掉600ul上清,之后用枪轻轻吹打重悬菌体。之后加到含相应抗生素的LBYEB平板上,用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min,待液体被吸收后,倒置平板,28培养2-3天。【注意:当平板只含转化所用双元载体抗生素时,28培养48h即可;当平板中加入双元载体抗生素的同时,再加入20μg/ml 利fu平时,需28培养60h;若使用的平板含50μg/ml 利fu平,需在28培养72-90h。】


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10×100μl

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10×100μl


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Rifampicin, USP Grade 利fu平

1g

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5g

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Spectinomycin Dihydrochloride Pentahydrate 壮观mei素二妍酸盐五水合物

5g

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Spectinomycin Dihydrochloride Pentahydrate 壮观mei素二妍酸盐五水合物

25g

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Carbenicillin, Disodium Salt 羧苄青mei素二钠盐

5g

MS0017-25G

Carbenicillin, Disodium Salt 羧苄青mei素二钠盐

25g

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Kanamycin Sulfate 硫酸卡那mei素

10g

MS0019-25G

Kanamycin Sulfate 硫酸卡那mei素

25g

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Gentamycin Sulfate Salt 硫酸庆大mnei素

1g

MS0023-25G

Streptomycin Sulfate, USP Grade 硫酸链mei素

25g


附表1 固体和液体LB培养基配方

组分Component

LB(液体)/

LB(固体)/

胰蛋白胨 Tryptone

10g

10g

酵母提取物 Yeast extract

5g

5g

氯化钠 NaCl

10g

10g

1N NaOH

调整pH7.0

调整pH7.0

琼脂 Agar

/

15g



附表2 固体和液体YEB培养基配方

组分Component

YEB(液体)/

YEB(固体)/

胰蛋白胨 Tryptone

5g

5g

酵母提取物 Yeast extract

1g

1g

牛肉浸膏 Beef Extract

5g

5g

蔗糖 Sucrose

5g

5g

七水硫sun镁 MgSO4·7H2O

0.49g

0.49g

1N NaOH

调整pH7.0

调整pH7.0

琼脂 Agar

/

15g


附表3常见农杆菌对抗生素敏感性总表

农杆菌菌株

羧苄(carb

链mei素(strep

利fu平(rif

庆大mei素(gent

卡那mei素(kan

EHA101

S

S

R

S

R

EHA105

S

S

R

S

S

LBA4404

S

R

R

S

S

GV3101

S

S

R

R

S

AGL1

R

S

R

S

S

备注】:S代表敏感,R代表抗性。



— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】


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