Benzonase 全能核酸酶蛋白抽提

                       Benzonase Nuclease 全能核酸酶/广谱核酸酶
                             （酵母重组表达，无细菌内毒素残留，无蛋白酶污染）

产品关键词：
Benzonase Nuclease 全能核酸酶（广谱核酸酶）；粘质沙lei氏菌（Serratia Marcescen）；非特异性核酸内切酶；RIPA裂解液；DNA/RNA降解；CAS：9025-65-4；

基本描述：
Benzonase，中文名全能核酸酶，或广谱核酸酶，一种源于粘质沙lei氏菌（Serratia Marcescen，又称为灵杆菌）的非特异性核酸内切酶，由两个*一样的亚基构成，每个亚基大约30kDa，含有245个氨基酸和两个必需的二硫键。可以切割和降解各种形式的DNA和RNA（单链，双链，线性，环状，或超螺旋形式），生成含有5’-磷酸末端的3-5个寡核苷酸残基片段，并且在很多种操作条件下有效。对核酸碱基序列无特异性要求，可在链内任意核苷酸间进行切割，广泛用于去除生物制品中的核酸。

主要应用：
1、科研研究中，作为培养细胞上清和细胞裂解液去粘度的*酶制剂，去除核酸干扰提高后续蛋白纯化或功能研究；
需求背景：进行重组蛋白纯化或者天然蛋白提取研究中，*步就需要用细胞/组织裂解液如RIPA对其进行裂解释放蛋白，此时往往伴随着大量的基因组DNA被释放出来，很多并不是独立存在的，往往与核蛋白以复合物的形式存在，导致提取物非常粘稠，呈鼻涕状。蛋白提取过程中若不能很好处理这些粘稠基因组，会造成蛋白提取效率的降低极核蛋白的丢失。传统方法有采用超声处理，DNase/RNase消化来降低或消除核酸影响，但由于操作的非标准化，通常难以评估此核酸清除步骤的有效性和数据稳定性。
此时，若在加裂解液的同时加入一定量的Benzonase Nuclease全能核酸酶（广谱核酸酶），可以很好的清除粗提物中的核酸，有效降低粘度【见图1】，提高后续操作的效率。
                                                               
图1、细胞裂解液经Benonase处理和未处理的比较图。左管是仅加RIPA裂解液所得的离心产物，可看到鼻涕状粘稠物悬浮在管中；右管事加RIPA裂解液和Benonase共同处理所得的离心产物，可看到上清非常透明。


2、用在生化分析样品制备— — ELISA、色谱分析、双相电泳和足迹分析等过程，使用本品benonase处理含有核酸的蛋白样品，可提高分辨率，以及提高回收率。


3、疫苗工业、蛋白和多糖类制药工业，去除宿主核酸残留，使得疫苗和蛋白类核酸污染显著降低至皮克级别，提供生物功效。


4、防止细胞凝聚（Cell clumping），特别是融化冻存的细胞样品时；
应用优势：Benonase不仅无蛋白酶活性，而且不会对健康细胞的生长造成干扰。
应用背景：全血来源的外周血单个核细胞（PBMCs）在疫苗研究中具有重要的应用价值，比如，定量疫苗诱导的T细胞反应。T细胞反应实验zui初要求新鲜分离的细胞从而达到zui加的检测信号，这给大规模的实验中对样本处理提出严格的操作限制。然而，冻存PBMCs（尤其是从冻存血液中分离出的PBMCs）一旦融化非常容易聚集到一起，影响后续的分析。
应用示例：Smith JG et al.研究显示Benonase（≥50 U/ml）加入PBMC融化缓冲液中有效预防细胞凝聚，从而使得PBMC冷冻保存的应用成为可能。【文献来源：Smith JG et al.Development and validation of a gamma interferon ELISPOT assay for quantitation of cellular immune responses to varicella-zoster virus. Clin Diagn Lab Immunol. 2001 Sep;8(5):871-9.】

Fig. 2. Comparison of results with frozen PBMCs isolated from freshly collected blood versus blood stored overnight (4°C). SFC represent the adjusted VZV ELISPOT response, i.e., the mean response to VZV antigen for replicate wells minus the mean response to MRC-5 control antigen for replicate wells.


产品优势：
1、酵母重组表达，无细菌内毒素残留。【大部分商业化的Benonase都是大肠杆菌重组表达，由于自身菌株特性，不管纯化方法如何，或多或少都会受细菌内毒素影响。】
2、无蛋白酶残留，不会对蛋白本身造成干扰，影响测试结果准确性。
3、比活力高≥1.0×106U/mg蛋白【活性单位定义：在37℃，pH8.0反应条件，2.625ml反应体系中，30min内使△A260吸收值变化1.0（相当于*消化37μg鲑鱼精DNA成为寡核苷酸）所用的酶量定义为一个活性单位（U）】
4、提供两种纯度的产品：≥ 90%（SDS-PAGE），以及≥ 99%（SDS-PAGE），前者满足zui基本的科研应用，价格更经济实惠；后者满足生物制品要求。
5、酶活性值：≥250 U/μL。对于小体积制备物，可用稀释缓冲液20mM Tris-Cl pH8.0, 2mM MgCl2, 2mM NaCl稀释到一定浓度，再加入体系中。稀释后溶液可4℃保存几天维持稳定。
6、液体酶形式提供，使用更方便。直接加入裂解液共同使用即可。

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【注】：Benzonase is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

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注意事项
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
本产品仅能用作科研用途，不可他用。

— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

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