Deoxyribonuclease 脱氧核糖核酸酶RNA提取

                                                             Deoxyribonuclease I (DNase I) 脱氧核糖核酸酶I

本品来自牛胰腺，色谱纯化制备，常用于去除蛋白或RNA样品中的DNA，或者用于向DNA中引入缺口使标记碱基插入DNA。本品以含氯化钙的冻干粉形式供应，比活≥2000Kunit Units/mg蛋白。

Deoxyribonuclease I (DNase I) 脱氧核糖核酸酶I产品特性

　　1)CAS NO：9003-98-9

　　2)蛋白纯度：≥80%(biuret)，色谱纯化

　　3)比活力：≥2000Kunit

　　Units/mg protein

　　4)活力定义：25℃，pH5.0条件下DNase催化底物DNA，使每毫升每分钟ΔA260增加0.001的变化定义为一个酶活力单位(Kunitz unit)。

　　5)激活剂：多种二价金属离子如Mg2+、Mn2+、Ca2+、Co2+、and Zn2+

　　6)抑制剂：β-巯基乙醇;螯合剂;SDS;肌动蛋白;并没有特异性抑制DNase I酶活的通用抑制剂，比如柠檬酸盐抑制Mg2+活化的DNase I，但不能影响Mn2+激活的DNase I。

　　7)溶解性：溶于0.15M NaCl(5mg/ml)，无色透明溶液

　　保存与运输方法

　　保存：冻干粉-20℃干燥冻存，至少3年稳定。

　　运输：冰袋运输。

　　常见问题

　　1. 如何溶解DNase I粉末?

　　将本品溶解于0.15 M NaCl溶液，可配置成5-10

　　mg/ml的储存液，-20℃分装冻存。需要注意：本品储存液即使-20℃分装冻存，一周可能会有<10%活力损失;置于2-8℃，约会有20%活力损失。

　　2. 如何将本品活力换算成质量?

　　根据本品各批次的比活力和蛋白含量，比如当酶比活力为2000 Kunits/mg，蛋白含量为100%(biuret)也，那么15KU=15000Kunits/2000Kunits/mg/100%=7.5mg本品。

　　3. 使用多大浓度DNase I用来去除溶液内的DNA?

　　在含50mM Tris-HCl(pH7.5)，10mM MgCl2的溶液体系内，加入20-50μg DNase I，并于37℃孵育60min以去除DNA污染。本用量仅作参考，具体实验请做适当调整。

Deoxyribonuclease I (DNase I) 脱氧核糖核酸酶I描述

　　脱氧核糖核酸酶I，英文Deoxyribonuclease I，缩写DNase I，在大多数细胞和组织中都能发现的一种核酸内切酶，偏好切割邻近嘧啶的磷酸二酯键，产生5’端为磷酸基团、3’端为羟基的多聚核苷酸，平均消化产物zui小为多聚四核苷酸。Mg2+存在条件下，DNase I可随机识别和切断DNA任一条链上的任意位点;而在Mn2+存在条件下，DNase I识别DNA的两条链并在几乎相同的位点进行切割。DNase I可水解多种形式DNA，如单链DNA、双链DNA，甚至染色质(其切割速率受组蛋白影响)。

的工作范围是pH 7-8，DNase的活性依赖于Ca2+，并可被二价金属离子如Co2+，Mn2+，Zn2+等激活。5mM Ca2+可保护酶使其不被水解，而0.1mM Ca2+可使酶失活速率降至原来的1/2。

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