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酵母感受态细胞 克隆与表达分析

酵母感受态细胞 克隆与表达分析

简要描述:

AH109 Chemically Competent Cell 酵母感受态细胞 克隆与表达分析,AH109是MATa型,能直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187通过接合(mating)操作进行蛋白相互作用验证或双杂交文库筛选和构建。

产品时间:2024-03-21

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AH109 Chemically Competent Cell

酵母菌化学感受态细胞

 

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见我司整理的酵母双杂交(Yeast two-hybrid assay)产品专题。

产品标签

Matchmarker GAL4双杂交系统;Y2HGoldpGBKT7Y187pGADT7AUR1-CAureobasidin A AbA);金担子素;

产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

AH109 Chemically Competent Cell

酵母菌化学感受态细胞

MF2356-1000UL

10×100μl

290

MF2356-5000UL

50×100μl

1320

产品包装

组分编号

组分名称

保存

货号(规格)

MF2356-1000UL

MF2356-5000UL

MF2356-A

AH109 Chemically Competent Cell

-80

10×100μl

50×100μl

MF2356-B

pGADT7 Control Vector (10ng/μl)

-80

10μl  

10μl  

MF2356-C

Carrier DNA (5μg/μl)

-20

100μl 

500μl 

MF2356-D

PEG/LiAC Solution

+4

5ml

25ml

产品描述

AH109GAL4系统酵母双杂交用实验菌株,来源于PJ69-2A酵母菌株,引入lacZ报告基因从而产生AH109

AH109MATa型,能直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187通过接合(mating)操作进行蛋白相互作用验证或双杂交文库筛选和构建。AH109-GAL4酵母双杂交系统需要两种质粒配套使用,分别为pGBKT7pGADT7。前者筛选标志为Trp,用于表达DNA-BD与诱饵蛋白(bait)的融合蛋白;后者筛选标志为Leu,用于表达AD与诱捕蛋白(prey)的融合蛋白。AH109有四个报告基因:lacZHIS3, ADE2, MEL1,分别由三个*异源的Gal4反应启动元件-G1G2M1调控,这三种启动子只有GAL4识别的17bp核心区相同,其余部分都不同。这一特征有效缩减假阳性发生的概率。因为,任何诱捕蛋白单独结合引起假阳性都需要识别3个不同序列,激活4个报告基因表达。

本品为经特殊工艺制备的AH109酵母菌化学感受态细胞,用pGADT7质粒检测转化效率>104cfu/μg DNA。且在-80能稳定保存三个月。

基因型

MATa, trp1-901, leu2-3, 112, ura3-52, his3-200, gal4Δ, gal80Δ, LYS2::GAL1UAS-Gal1TATA-His3, MEL1GAL2UAS- Gal2TATA-Ade2, URA3::MEL1UAS-MEL1TATA- lacZ

注意事项

1/在冰上融化感受态细胞。

2/转化高浓度质粒可相应减少用于涂板的菌量。同时转化2-3种质粒可适当增加质粒的用量。

3/AH109对高温敏感,zui适生长温度为27-30,一旦高于31,生长速度和转化率都呈指数下降。

4/菌落变粉红色并不是污染,而是酵母细胞生长中的一种常见现象。当酵母细胞在平板上培养几天,将平板内的腺嘌呤消耗殆尽,那时酵母试图通过自身代谢途径合成腺嘌呤以供利用。然而,某些菌株ADE2基因被破坏,腺嘌呤合成受阻。且ADE45678基因均正常。由此,造成中间产物P-ribosylamino imidazoleAIR)在细胞的积累使得菌落变为粉红色。

5/酵母菌在缺陷培养基上生长速度比YPDA培养基慢,营养缺陷成分越多,生长越慢,以转化涂板为例:涂YPDA平板于2948h培养可见直径1mm克隆;涂SD单缺平板于2948-60h培养可见直径1mm克隆;涂SD双缺平板于2960-80h培养可见直径1mm克隆;涂SD三缺或四缺平板于2980-90h培养可见直径1mm克隆;

6/为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

相关产品

货号

名称

规格

MF2351-300UL

Y2HGold Yeast Strain 酵母双杂交用甘油菌

300μl

MF2352-1000UL

Y2HGold Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

10×100μl

MF2353-300UL

Y187 Yeast Strain 酵母双杂交用甘油菌

300μl

MF2354-1000UL

Y187 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

10×100μl

MF2355-300UL

AH109 Yeast Strain 酵母双杂交用甘油菌

300μl

MF2356-1000UL

AH109 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

10×100μl

MF2501-200T

Yeast Transformation Kit 酵母转化试剂盒

200T

MS6303-350G

YPDA Agar Medium YPDA琼脂培养基

350g

MS6304-250G

YPDA Medium YPDA液体培养基

250g

 

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

 

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AH109 Chemically Competent Cell 酵母感受态细胞 克隆与表达分析

AH109 Chemically Competent Cell 酵母感受态细胞 克隆与表达分析

 

 

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